Электрофорез с никотиновой кислотой: Электрофорез

Содержание

краткое описание процедуры, показания и противопоказания, действие, отзывы

Электрофорез – это метод безопасного и безболезненного введения медицинских препаратов к очагу повреждения. Под воздействием электрических импульсов лекарственные средства превращаются в мельчайшие частицы, называемые ионами, которые впоследствии доставляются в пораженные области. Препараты хранятся в слоях дермы и постепенно с током крови и лимфы расходятся по всему организму.

Как действует электрофорез

Для электрофореза используется гальванический ток – это электрический ток постоянного невысокого напряжения и небольшой силы. Под его воздействием в кожу и слизистые оболочки вводятся частицы лекарственного средства. Самой большой подвижностью обладают ионы тех лекарств, которые растворяется в воде. Оно попадает в эпидермис и накапливается в верхнем слое дермы. Под действием электрического тока медикаменты углубляются до полутора сантиметров, образуя своеобразное хранилище, из которого поступают в клетки и ткани органов.

Основные преимущества электрофореза

Электрофорез с никотиновой кислотой – это движение в электрическом поле заряженных ионов витамина PP. Проникая в ткани различных органов, лекарственное средство равномерно распределяется в межклеточной жидкости и клетках. При выполнении этой процедуры могут использоваться не только гальванические, но и диадинамические, синусоидальные модулированные, флюктуирующие и выпрямленные токи. Сущность процедуры от этого не меняется – никотиновая кислота доставляется в нужное место с помощью электрического тока. Благодаря этой процедуре под кожей создается и хранится запас лекарства, который постепенно расходуется.

Никотиновая кислота продолжительный период медленно поступает в кровоток, улучшая работу больного органа. Благодаря электрическому току ее действие усиливается, поэтому доза препарата вводится незначительная. Кроме этого, выведение лекарства также происходит медленно. Процедура совершенно не причиняет боли, поэтому очень часто врачи назначают грудничкам электрофорез с никотиновой кислотой.

Особенности применения «Эуфиллина»

«Эуфиллин» представляет собой сложный препарат, который используется для:

  • снятия спазмов бронхов;
  • расслабления гладкой мускулатуры;
  • увеличения диуреза;
  • уменьшения тромбообразования;
  • снижения внутричерепного давления;
  • обезболивания;
  • улучшения кровотока.

Электрофорез с эуфиллином противопоказан при проблемах с печенью, почками, сердцем и непереносимостью препарата. Могут возникнуть побочные реакции в виде головной боли, снижения давления, нарушения сна. В процессе манипуляции наблюдаются небольшие покалывания.

Использование никотиновой кислоты для электрофореза

Никотиновая кислота или ниацин – это витамин PP, способствующий улучшению кровообращения. Он содержится в небольших количествах в рыбе, молоке, крупах и фруктах, дрожжах. Искусственные аналоги витамина выпускаются в таблетках. Раствор никотиновой кислоты для электрофореза способствует:

  • Улучшению углеводного обмена. Его используют при заболеваниях сердца, органов пищеварения, печени и сахарном диабете.
  • Заживлению ран на слизистых оболочках и коже.
  • Расширению сосудов.
  • Разжижению крови.
  • Снижению уровня холестерина крови.

Кроме этого, никотиновая кислота оказывает положительное влияние на работу головного мозга и нормализует артериальное давление.

С эуфиллином и никотинкой

Электрофорез с эуфиллином и никотиновой кислотой нередко используется для лечения детей до года при:

  • травмах малыша во время родов;
  • гидроцефальном синдроме;
  • гипо- или гипертонусе мышц.

Для взрослых электрофорез с этими двумя препаратами применяют при:

  • болях в спине;
  • восстановлении кровообращения головного мозга;
  • болезнях шейного отдела позвоночника;
  • нормализации кровотока в конечностях.

Следует помнить, что длительное введение больших доз никотиновой кислоты опасно возникновением жировой дистрофии печени.

Требования к лекарствам для электрофореза

При электрофорезе используют только те препараты, которые под воздействием электрического тока способны проникать в дерму. Они вводятся самостоятельно и в комплексе с использованием других средств для усиления эффекта. Электрофорез можно проводить, если:

  • лекарственный препарат не содержит примесей;
  • раствор приготовлен перед использованием;
  • для приготовления применялась дистиллированная вода;
  • в случае нерастворимости препарата в воде используется медицинский спирт или «Димексид»;
  • готовится раствор ферментов, то растворителем служат буферы;
  • во время всего курса полярность электродов остается неизменной.

Надо отметить, что использовать в качестве растворителя физиологический раствор нельзя. Количество медицинского препарата, который поступает в организм, зависит от:

  • возраста больного;
  • индивидуальных особенностей организма;
  • состояния кожи;
  • площади поверхности электрода;
  • силы и плотности тока;
  • используемого растворителя;
  • продолжительности процедуры;
  • количества препарата.

Электрофорез с никотиновой кислотой грудничку. Отзывы

Часто при различных родовых травмах, внутриутробных отклонениях или возникших заболеваниях грудничкам назначают процедуру электрофореза с никотиновой кислотой. Она расслабляет мышцы малыша, оказывает противовоспалительное и анальгезирующее действие. Ее назначают при следующих патологических состояниях:

  • кривошея, дисплазия суставов;
  • неврологические расстройства;
  • диатез;
  • переломы, вывихи;
  • нарушение мышечного тонуса;
  • болезни пищеварительной системы;
  • воспаления дыхательной и мочевыделительной системы;
  • стоматит;
  • глазные заболевания;
  • родовые травмы;
  • реабилитация после операции.

Электрофорез с никотиновой кислотой для детей является безопасной процедурой и переносится лучше, чем инъекции, но ее нельзя проводить при:

  • почечной и сердечной недостаточности;
  • склонности к аллергии;
  • плохой свертываемости крови;
  • наличии новообразований;
  • бронхиальной астме;
  • гнойничковых высыпаниях;
  • непереносимости электротока;
  • повышенной температуре;
  • повреждениях кожных покровов.

Для грудничков часто используют никотиновую кислоту совместно с эуфиллином. Это дает положительный эффект при нарушении тонуса мышц, родовых травмах и гидроцефалии. Перед процедурой доктор проводит обследование малыша и выявляет противопоказания.

Мнения родителей, детям которых был назначен электрофорез с никотиновой кислотой, неоднозначны. Одни из них считают, что процедуры имеют хороший эффект. Груднички быстрее восстанавливались после родовых травм, особенно если был поврежден шейный отдел. Малыши начали держать головку, переворачиваться и ползать. Другие отмечают, что после нескольких процедур электрофореза с никотиновой кислотой, дети становятся беспокойными, отказываются от груди, у них нарушается сон, появляется аллергическая реакция на коже. Малышам старше четырех месяцев тяжело пролежать без движения весь сеанс.

На самом деле, электрофорез является полезной и безопасной процедурой для грудничков. Лекарство доставляется прямо в пораженные зоны, и ребенок не получает нагрузки на внутренние органы, что очень важно для неокрепшего организма.

Как проводится процедура

Электрофорез выполняется в физиотерапевтическом кабинете специально подготовленным медицинским персоналом. Для лечения детей раннего возраста, как правило, назначается десять сеансов, каждый из которых длится от 5 до 25 минут. Перед процедурой (за полчаса до нее) ребенок должен быть накормлен. Проводят манипуляцию следующим образом:

  • Ребенок находится в горизонтальном положении. В исключительных случаях разрешают держать его на руках.
  • Марлевую салфетку смачивают в составе лекарственного средства и накладывают на область поражения, фиксируя тканевой повязкой.
  • Электроды помещают на салфетку, включают электрический ток и следят за реакцией малыша. Он испытывает легкие покалывания.
  • После завершения сеанса кожу протирают чистой салфеткой и смазывают детским кремом.

В случае необходимости повторный курс лечения проводится не раньше, чем через месяц. А также существуют и другие методики электрофореза с никотиновой кислотой:

  1. Полостная – в полость больного органа (влагалище или прямую кишку) вводят лекарство и один электрод, а второй оставляют на внутренней поверхности тела. Метод применяется при болезнях органов малого таза и толстого кишечника.
  2. Ванночковая – емкость наполняют медикаментозным средством и погружают в нее поврежденную конечность.
  3. Внутритканевая – при помощи инъекции вводят препарат и на эту же область накладывают электроды. Этот метод дает хороший эффект при заболеваниях дыхательной системы: бронхите и ларингите.

Электрофорез шейно-воротниковой зоны

Безопасность и высокая эффективность лечения токами приобрела большую популярность. Электрофорез с никотиновой кислотой на воротниковую зону используется при повреждении челюстно-лицевых мышц. Он нормализует поврежденные ткани и восстанавливает работу мышц.

Для проведения процедуры используют специальный прибор, генерирующий ток. На пациента надевают специальную прокладку, которая закрывает плечи, шею и лопатки. Под нее кладут фильтровальную бумагу, смоченную теплым раствором никотиновой кислоты. Температура раствора доводится до 38 градусов. Один электрод закрепляют на прокладке, а другой кладут между поясницей и крестцом. Расчет дозировки для проведения электрофореза с никотиновой кислотой на воротниковую зону делается индивидуально для каждого пациента. При этом учитывают:

  • плотность тока;
  • размер прокладки;
  • время проведения процедуры;
  • концентрацию кислоты;
  • способность препарата распадаться на ионы;
  • индивидуальные особенности организма к воздействию электрического тока.

Плотность тока зависит от величины прокладки и находится в обратно пропорциональной зависимости. Во время процедуры сила тока постепенно увеличивается. Курс лечения состоит из 15–20 процедур. При необходимости его можно повторить спустя месяц.

Техника электролечения

Для лечения электрофорезом применяют разные техники, имеющие большую эффективность для лечения определенных заболеваний. Вот несколько из них:

  • По Бургиньону (глазнично-затылочный) – на глаз поверх закрытых век кладут маленькую прокладку, пропитанную лекарственным средством. Вторую – помещают на задней поверхности шеи. Манипуляция продолжается полчаса, сила тока 4 мА. Такое лечение действенно при неврите тройничного или лицевого нерва, при воспалениях и травмах сосудов головного мозга.
  • По Ратнеру – применяют при сбое кровообращения в отделе шеи, ДЦП Особенно широко используется электрофорез по Ратнеру с никотиновой кислотой для лечения послеродовых травм у детей.
  • Назальный – тампон с лекарством вставляют в обе ноздри и прикладывают электрод. Второй размещают на задней стороне шеи с прокладкой 8 х 10. При силе тока в 2 мА манипуляция длится от 10 до 20 минут. Этот электрофорез эффективен для лечения головного мозга с сосудистыми, воспалительными и травматическими патологиями, а также при сбое обменных процессов и язвенных поражениях желудка.

Использование электрофореза для лечения глазных заболеваний

В офтальмологической практике нередко применяют электрофорез на закрытые веки по Бургиньону. Этот щадящий метод лечения используется сразу после травм или операций, при изменениях эпителия роговицы, воспалительных процессах, кровоизлияниях в среде глазного яблока. Особенно часто дети в школьном возрасте страдают миопией. Большая зрительная нагрузка во время учебного процесса и постоянная работа на компьютере приводит к снижению кровотока, что провоцирует слабость аккомодации и дистрофию в диске зрительного нерва.

В профилактических целях для приостановки прогрессирования миопии используют препараты для улучшения гемодинамики глаза и усиления обменных процессов в сетчатой оболочке. Одним из таких лекарственных средств и является витамин PP. А электрофорез с никотиновой кислотой для глаз признан эффективной и безболезненной процедурой. Противопоказания к проведению – это повреждение кожи век, слизисто-гнойные выделения, повышенное внутриглазное давление, различные новообразования и индивидуальная непереносимость.

Электрофорез при остеохондрозе шейного отдела позвоночника

Недостаток движения и сидячий образ жизни часто приводит к деформации шейных позвонков, а это вызывает возникновение остеохондроза. Развитию болезни способствует:

  • неправильная поза посадки за столом;
  • несимметричная работа мышц позвоночника;
  • ношение сумки на одном плече;
  • выполнение физических нагрузок без разминки;
  • использование мягких матрасов и подушек;
  • избыточный вес.

Остеохондроз является хроническим заболеванием, излечить недуг полностью невозможно. Однако снять боль в период обострения и облегчить состояние пациента вполне возможно. Для этого врачи часто назначают электрофорез с никотиновой кислотой. Витамин PP положительно влияет на:

  • метаболические процессы, стабилизируя их;
  • улучшение липидного и углеводного обмена;
  • расширяет кровеносные сосуды, в результате нормализуется кислородный обмен и питание тканей хряща.

Процедуры проводятся ежедневно, курс лечения – это десять манипуляций. Остеохондроз – тяжелое заболевание, причиняющие сильные боли. Иногда для облегчения состояния и усиления эффекта применяют электрофорез с эуфиллином и никотиновой кислотой. Такое лечение дает хороший результат, и больной быстро восстанавливается.

Электрофорез в гинекологии и при беременности

В гинекологии электрофорез широко используется для терапии воспалительных хронических процессов. Его используют для лечения эндометриоза и эрозии шейки матки. В этом случае используют метод тканевого электрофореза, когда лекарство проникает прямо в район повреждения. Без острой необходимости беременным женщинам витамин PP не выписывают, он может содержаться только в витаминных комплексах. Дополнительные дозировки препарата и электрофорез с никотиновой кислотой показан при:

  • патологии плаценты;
  • нарушении функционирования печени, спровоцированной беременностью;
  • зависимости беременной женщины от алкоголя и наркотиков;
  • склонности к тромбообразованию;
  • многоплодной беременности.

В результате у рожениц происходит улучшение оттока лимфы и снабжение кислородом плода. Процедура должна проходить строго под наблюдением врача. При грудном вскармливании электрофорез с никотиновой кислотой делать не желательно.

Побочные эффекты

Электрофорез – это одна из самых безопасных процедур, которая не вызывает тяжелых осложнений. Хотя у грудничков отмечают появление следующих побочных эффектов:

  • В месте наложения электродов происходит покраснение дермы.
  • Возможны раздражения кожных покровов.
  • Во время процедуры ребенок ощущает покалывание. Некоторые малыши начинают капризничать и срывать электроды.

У детей постарше и взрослых во время проведения электрофореза с никотиновой кислотой или через определенное время возможно:

  • появление красных пятен, шелушения кожи или волдырей;
  • учащенное сердцебиение;
  • затрудненное дыхание, одышка, кашель;
  • ухудшение общего состояния — появление вялости сонливости, отсутствие аппетита;
  • повышение температуры тела.

При обнаружении вышеописанных симптомов во время сеанса процедура прекращается. Возникновение признаков недомогания дома требует немедленного обращения в больницу, где врач даст соответствующие рекомендации по устранению возникшей ситуации.

Электрофорез с никотиновой кислотой, отзывы о котором в большей степени положительны, очень широко применяется в медицине и косметологии. Хотя есть пациенты, которым пришлось отказаться от процедур из-за аллергических реакций на препарат или электрический ток. Несмотря на это, электрофорез положительно воздействует на организм как грудничков, так и взрослых людей.

Электрофорез с Никотиновой кислотой в воротниковую зону детям

Электрофорез – метод из области физиотерапии, который заключается в воздействии на организм с помощью электрических импульсов. Этот способ лечения из области традиционной медицины практикуется уже долгое время и с помощью него можно значительно улучшить состояние больного. Также с помощью данной процедуры можно через кожу вводить лекарственные препараты, что имеет некоторое преимущество перед пероральными и инъекционными методами введения медикаментов.Процедура показана для лечения таких органов и систем организма:
  • Болезни дыхательных путей
  • Болезни ЛОР-органов или верхних дыхательных путей
  • Заболевание желудочно-кишечного тракта и других органов пищеварения
  • Болезни мочеполовой сферы
  • Нервные расстройства
  • Нарушения двигательной функции человека
  • Болезни кожных покровов
  • Заболевания глаз
  • Стоматологические проблемы.

Достаточно большой перечень медицинских препаратов вводится через кожу, но существует особый рецепт по Ратнеру – электрофорез с никотиновой кислотой и эуфиллином. Для чего он нужен и в каких случаях поможет?

Основные преимущества электрофореза

Главные плюсы физиотерапевтического метода:

  • Медикаменты вводятся в ионизированной форме, которая является активной
  • При желании можно создать высокую концентрацию действующих веществ в определенном месте, но при этом системного воздействия наблюдаться не будет, и препараты не будут попадать в кровь
  • Локальная терапия воспалительного процесса в организме
  • Активные компоненты лекарственных препаратов не разрушаются подобным методов введения
  • Ток несет в себе полезные свойства – стимулирует иммунную реакцию организма по отношению к внешнему возбудителю, проявляется гуморальные и рефлекторные свойства у организма
  • Наблюдается пролонгированное действие медикамента, так как в такой способ лекарство накапливается в клетках.

Противопоказания к применению:

  • Заболевания, сопровождающиеся нагноениями
  • Наличие острой сердечной недостаточности
  • Повышенная температура тела
  • Тяжелая форма бронхиальной астмы
  • Наличие дерматитов или механических повреждений эпидермиса в месте, где требуется воздействие тока
  • Индивидуальная непереносимость процедуры
  • Онкологические заболевания в анамнезе.

Особенности терапии с эуфиллином

Эуфиллин – комбинированный медикамент на основе смеси теофиллина и этилендиамина. Обычно для процедуры используется инъекционная форма препарата в концентрации 2.4% в количестве 5 мл. Препарат обладает такими фармакологическими эффектами:

  • Снимает спазм мышц бронхов
  • Расслабляет гладкие мышечные волокна, за счет чего происходит расширение крупных сосудов сердечной мышцы, мозга и почек
  • Способствует выведения лишней жидкости из организма за счет усиления процесса диуреза
  • Медикамент успешно препятствует склеиванию тромбоцитов, что снижает риск образования тромбов
  • Стимулирует деятельность дыхательного центра и сердечной мышцы.

В детском возрасте до 1 года могут назначить электрофорез с эуфиллином в таких целях:

  • Для улучшения кровообращения в головном мозге и почках
  • Для нормализации мышечного тонуса при гипертонусе и гипотонусе
  • Для снижения внутричерепного давления
  • Борьба с суставной дисплазией
  • Борьба с застойными явлениями в мягких тканях, для снижения болевых ощущений и улучшения состояния организма.

Процедура противопоказана при наличии серьезных почечных патологий, сердца и печени, а также при наличии индивидуальной непереносимости. Возможные побочные эффекты от действующего вещества: нарушения сна, тремор, мигрень, гипотония и аллергическая реакция. Правда, при введении вещества посредством физиотерапевтического метода лечения негативные явления крайне редки.

Важно помнить, что с медикаментом процедура электрофореза проводится только в стационарных условиях у опытного врача, который хорошо разбирается в регулировке силы тока и количествах требуемых препаратов для сеанса. Обычно лекарство пропитывается толстым бумажным слоем, наматывается на электрод, поверх которого наматывается марля, а затем уже вся конструкция накладывается на требуемый отдел тела – воротничковый, почечный или ягодичный. Длительность сеанса занимает не более 10 минут, болевые ощущения не возникают, только легкое покалывание в зоне воздействия. Обычно для полного излечения хватает до 10 сеансов лечения. Также это средство применяется при позвоночных грыжах, остеохондрозе, остеоартрозе и бронхиальной астме.

В основном лечение с никотиновой кислотой проводится для комплексной борьбы с остеохондрозом. Этот витамин быстро помогает вывести молочную кислоту из пораженных мягких тканей, которая вызывает сильные болевые ощущения, отеки и скованность движений. Применение витамина РР в физиотерапевтическом лечении оправдано, так как он легко проникает при локальном введении через кожу в требуемое место. Из-за выраженных свойств средства облегчение наступает после первой процедуры.

Также процесс излечения от остеохондроза с никотиновой кислотой проходит быстрее по той причине, что медикамент сильно улучшает микроциркуляцию и ток крови, из-за чего другие лекарственные препараты лучше поступают в кровь больного. Для проведения процедуры достаточно использование в одном сеансе одной ампулы витамина РР 10 мг. Кратность сеансов – ежедневно, раз в сутки в течение полутора недель. Если есть необходимость, то периодически курсы терапии повторяются с целью профилактики и устранения болевых ощущений.

Использование эуфиллина с никотиновой кислотой

Основные эффекты, которые проявляет витамин РР:

  • Улучшение углеводного обмена, вспомогательное средство при сахарном диабете 2 типа, при болезнях печени, желудка, сердца и сосудов
  • Ускорение регенерации кожных покровов и слизистых оболочек
  • Вазодилатирующий эффект – расширение периферических сосудов тела
  • Снижение уровня вредного холестерина в крови.

В основном сочетание эуфиллина с витамином РР показано при сильном гипертоносе и гипотонусе мышц. Также это сочетание назначается грудным детям при наличии гидроцефального синдрома и в качестве вспомогательного средства для лечения послеродовых травм. Помимо этого, витамин РР используется для лечения гастрита, колита и язвы желудка с пониженной кислотностью, атеросклероза, ишемической болезни сердца, трофических язвах, спазмах сосудов. Не рекомендуется к длительному лечению, так как чревато появление жировой дистрофии печени.

Электрофорез и гальванизация с аппаратом ЭЛФОР

Применение лекарственного электрофореза и гальванизации с аппаратом ЭЛФОР для лечения заболеваний и повреждений опорно-двигательного аппарата

Одним из наиболее эффективных и распространенных методов физиотерапии является гальванизация и лекарственный электрофорез, при которых осуществляется воздействие постоянным электрическим напряжением, которое создается на лечебных электродах, установленных на теле пациента. Это приводит к возникновению постоянного непрерывного (гальванического) тока в тканях организма, расположенных между электродами (процедура гальванизации). Постоянное электрическое напряжение позволяет вводить лекарственные вещества, нанесенные на лечебные электроды в кожу и слизистые оболочки больного (процедура лекарственного электрофореза).

Известно, что гальванический ток обладает активным биологическим и лечебным воздействием на организм. Оно обусловлено возникающим направленным перемещением неорганических ионов (K+, Na+, Ca2+, Cl-, HCO3- ) и заряженных молекул в электрическом поле. В тканях под положительным электродом (анодом) повышается содержание отрицательных ионов и молекул и существенно понижается концентрация легких ионов калия и натрия, заряженных положительно, а под отрицательным электродом (катодом) повышается содержание положительных ионов и молекул, в особенности легких ионов натрия и калия. В результате воздействия положительного электрода (анода) происходит снятие или ослабление болей, спазмов сосудов и внутренних органов, скелетных мышц. Под отрицательным электродом (катодом) резко усиливается местное кровообращение, развивается гиперемия (краснота), происходит рассасывание рубцовой соединительной ткани, уменьшение воспаления. Поэтому процедуры гальванизации (ГВ) назначают для оказания обезболивающего, сосудорасширяющего противовоспалительного и рассасывающего эффекта.

В лечебной практике чаще применяются процедуры лекарственного электрофореза (ЛЭ), который представляет собой комбинированное воздействие гальваническим током и лекарственными веществами, вводимыми в организм током. Прежде всего, гальванический ток при ЛЭ оказывает присущее ему самостоятельное лечебное воздействие, описанное выше. Кроме того он становится “носителем” медикаментов, перемещающихся в электрическом поле. В отличие от других способов введения медикаментозных средств (таблетки, микстуры, иньекции, клизмы) при ЛЭ они попадают в организм больного в “очищенной” форме – в виде ионов и молекул, без балласта. Кроме того, гальванический ток активирует молекулы лекарств, повышает их специфическую эффективность. В результате проведения процедур в коже больного в области воздействия возникает “лекарственное депо”, которое сохраняется в течение многих дней и постепенно рассасывается за счет поступления лекарства в кровь. Лекарственное средство из “депо” оказывает местные и общие эффекты. Местное воздействие на кожу, нервы, мышцы, сосуды, суставы, кости, слизистые оболочки, внутренние органы наиболее выражено. Общее воздействие обеспечивается длительным сохранением “поддерживающей” концентрации медикамента в крови больных. Таким образом ЛЭ можно рассматривать как способ безыгольной инъекции лекарств, пригодный для лечения местных поражений и общих заболеваний организма. Он применяется как для непосредственного воздействия на патологические очаги (раны, язвы, обморожения, пролежни, измененные кости и суставы, болезненные мышцы, связки, позвоночник), так и для введения больному лечебных средств общего воздействия. Несмотря на то, что лекарство при ЛЭ поступает в организм в небольшом количестве, оно вызывает ожидаемые положительные реакции и эффекты. Побочные токсические и аллергические воздействия медикаментов при этом практически исключены.

При проведении ЛЭ применяются только лекарственные вещества, частицы которых (ионы и молекулы) обладают подвижностью в электрическом поле и перемещаются под действием приложенного электрического напряжения к положительному или отрицательному гальваническим электродам, а также проникать в кожу через устья потовых желез. Список лекарственных веществ и препаратов для ЛЭ приводится ниже (табл.1). При использовании других медикаментов и веществ эффективность лечения не гарантируется.

Для проведения процедур ГВ и ЛЭ используются физиотерапевтические аппараты “ЭЛФОР-ПРОФ”, “ЭЛФОР” и “Поток-1”. Аппараты “ЭЛФОР-ПРОФ” и “Поток-1” предназначены для использования в лечебных и оздоровительных учреждениях (больницы, поликлиники, санатории, санатории-профилактории). Они выполнены по 2-му классу электробезопасности (питание от сети 220в/50-60 Гц, без заземления) в виде настольной или настенной портативной конструкции. “ЭЛФОР” – это универсальный аппарат карманного формата с автономным электрическим питанием (9 В) от батареи типа “Корунд” или аккумулятора (3-й класс электробезопасности), который используется в лечебных учреждениях любого типа и профиля, косметических салонах, а также пациентами в домашних условиях. Аппарат можно использовать для самостоятельного лечения заболеваний различных органов и систем организма, и, в первую очередь, болезней ОДА, последствий травм и повреждений. Это позволяет значительно сократить лекарственную терапию, уменьшив тем самым риск ее побочных эффектов и возможного ущерба здоровью, а также снизить аптечные расходы. ЛЭ является одним из предпочтительных методов лечения для больных, у которых имеется лекарственная аллергия.

Напряжение питания аппарата “ЭЛФОР” составляет не более 9 В, максимальный ток, проходящий через электроды аппарата составляет не более 20 мА, габаритные размеры корпуса – 60х120х34 мм, а масса — не более 200 г.

Частные методики гальванизации и лекарственого электрофореза.

Конкретные рекомендации по месту установки электродов и применению лечебных препаратов для электрофореза больной должен получить у своего лечащего врача или врача-физиотерапевта.

  1. Деформирующий остеоартроз и посттравматические артрозы. Наиболее часто встречающимся заболеванием ОДА является деформирующий остеоартроз и хронический спондиллез, а также посттравматические артрозы и артрозо-артриты, при которых чаще всего страдают крупные суставы нижних конечностей (коленный, голеностопный, тазобедренный). При спондиллезе поражаются суставы поперечных отростков позвонков. Деформирующий остеоартроз и хронический спондиллез возникают после 45-50 лет и наибольшей выраженности они достигают у людей пожилого и старческого возраста. Частота этого заболевания составляет 35-40% среди лиц в возрасте старше 45 лет. Посттравматические артрозы являются следствием механических повреждений. Основной причиной развития деформирующего остеоартроза и хронического спондиллеза является дегенерация суставных хрящей и их постепенное замещение костной тканью. Это происходит в результате воздействия на исходно здоровые хрящи суставов избыточной массы тела больного (ожирение) или как следствие перенесенных ранее травм, заболеваний или наследственно обусловленной “несостоятельности” хрящевой ткани. Повреждение хрящей приводит к периодическому возникновению воспалительной реакции в суставах, что проявляется как обострение деформирующего остеоартроза. В период обострения резко усиливаются боли, возникает местный отек, увеличивается периметр суставов. При многолетнем неуклонном развитии заболевания суставы деформируются, обезображиваются, по их краям возникают множественные костные выросты – остеофиты. Оторвавшиеся некротизированные кусочки суставного хряща (“суставные мыши”) вызывают заклинивание суставов. Конечным итогом заболевания становится полная инвалидизация больных. Травмы суставов приводят к развитию посттравматических артрозов, которые отличаются сходным по характеру, но более мягким течением, чем деформирующий остеоартроз. При деформирующем остеоартрозе, хроническом спондиллезе и посттравматических артрозах коленного, голеностопного, локтевого, плечевого, лучезапястного суставов, мелких суставов кистей и стоп в фазе обострения применяется ЛЭ местноанестезирующих средств, анальгетиков и противовоспалительных средств (новокаина, анальгина, баралгина, салицилата натрия). Вне периода обострения больным артрозами показан ЛЭ средств, улучшающих состояние и питание суставных хрящей и околосуставных тканей, местное кровообращение (сера, цинк, литий, йод, никотиновая кислота, экстракт алоэ, лечебная грязь или грязевые отжимы).

1.1. Гальванизация. Показания: артрозы и спондилезы с умеренно выраженными болями и воспалительными проявлениями. Два длинных прямоугольных электрода площадью 20-100 см2 (в зависимости от калибра сустава) размещают поперечно в проекции суставной щели пораженного сустава. Электроды предварительно смачивают теплой проточной водой и отжимают, так чтобы при их последующей плотной фиксации не происходило растекания подэлектродной жидкости. Положительный электрод (анод) устанавливают в области максимальной болезненности. Электроды фиксируют, добиваясь их плотного контакта с кожей при комфортных ощущениях больного. Включают аппарат, потенциометром регулируют силу тока до появления у пациента ощущений приятного покалывания (жжения). Сила тока корректируется в ходе процедуры по субъективным ощущениям больного. При появлении дискомфорта, болей, сильного жжения в области электродов необходимо сразу же уменьшить силу тока. Продолжительность процедуры 10-20 мин. Процедуры проводят ежедневно, при упорных болях 2 раза в день. Курс – 10-20 процедур, в зависимости от динамики болевого синдрома.

1.2. Электрофорез новокаина. Показания: артрозы и спондиллезы с болевым синдромом в фазе умеренного обострения, то есть без ярких местных признаков воспаления. Новокаин – местноанестезирующее вещество, дает обезболивающий эффект. Методика проведения процедур такая же как при выполнении гальванизации (см. п. 1.1.). Положительный электрод (анод) устанавливают в области максимальной болезненности. Между ним и телом помещают лекарственную прокладку из 3-4 слоев марли или фильтровальной бумаги, смоченной 0.5% ампульным раствором новокаина гидрохлорида в количестве 2-10 мл. Количество лекарственного вещества, также как и площадь электродов, зависит от калибра пораженного сустава (2-4 мл на голеностопный сустав, 8-10 мл – на тазобедренный). Продолжительность процедуры 15-30 мин. Процедуры проводят ежедневно, при упорных болях 2 раза в день. Курс – 10-20 процедур, в зависимости от динамики болевого синдрома.

1.3. Электрофорез анальгина, баралгина или салицилата натрия. Показания: артрозы и спондиллезы в фазе обострения с картиной острого воспаления и при выраженных болях. Анальгин, баралгин и салицилат натрия обеспечивают не только противовоспалительный, но и заметный обезболивающий эффект. Процедуру проводят по методике, описанной в п.1.1., однако на область максимальной болезненности помещают электрод-катод (-) с лекарственной прокладкой, смоченной разведенным в 10 раз 50% ампульным раствором анальгина, 5% раствором салицилата натрия или 2% баралгина в количестве 2-15 мл (в зависимости от калибра пораженного сустава). Продолжительность процедуры 15-30 мин. Курс – 10-20 ежедневных процедур.

1.4. Двуполярный электрофорез новокаина и анальгина. Показания: артрозы и спондиллезы в фазе обострения, протекающем с упорным и выраженным болевым синдромом и местными воспалительными проявлениями. Методику проводят по п.1.1., однако между электродом-катодом (-) и телом помещают лекарственную прокладку, смоченную разведенным в 10 раз 50% ампульным раствором анальгина в количестве 2-15 мл (в зависимости от калибра пораженного сустава), а под электрод-анод (+) – лекарственную прокладку, смоченную 0.5% раствором новокаина гидрохлорида в количестве 2-10 мл. Продолжительность процедуры 15-30 мин. Курс – 10-20 ежедневных процедур.

1.5. Электрофорез серы. Показания: прогрессирующее течение артрозов и спондиллеза вне периода обострения. Сера входит в состав сложных органических веществ, составляющих основу хрящевой ткани. Цель применения ЛЭ серы – сохранение целостности и структуры суставного хряща. Методику выполняют по п.1.1., однако между электродом-катодом (-) и телом помещают лекарственную прокладку, смоченную 10-30 % водным раствором кислоты в количестве 2-8 мл, в зависимости от калибра пораженного сустава. Продолжительность процедуры – 15-30 мин. Курс – 10-20 ежедневных процедур.

1.6. Электрофорез цинка или лития. Показания: прогрессирующее течение артрозов и спондиллеза вне периода обострения. Микроэлементы цинк и литий необходимы для нормальной жизнедеятельности и функционирования соединительной ткани, связок, сухожилий, суставной капсулы и суставных сумок. Методику выполняют по п.1.1., однако между электродом-анодом (+) и телом помещают лекарственную прокладку, смоченную 2% раствором цинка сульфата или 3-5% раствором лития хлорида в количестве 2-5 мл, в зависимости от калибра пораженного сустава. Продолжительность процедуры – 15-30 мин. Курс – 10-20 ежедневных процедур.

1.7. Электрофорез йода. Показания: прогрессирующее течение артрозов и спондиллеза вне периода обострения, выраженные фиброзные и костные изменения, разрастание соединительной ткани в области сустава. Йод обладает хорошим рассасывающим воздействием. Методику выполняют по п.1.1., однако под электрод-катод (-) помещают лекарственную прокладку, смоченную 2 % водным раствором йодида калия в количестве 2-8 мл, в зависимости от калибра пораженного сустава. Продолжительность процедуры – 15-30 мин. Курс – 10-20 ежедневных процедур.

1.8. Электрофорез никотиновой кислоты. Показания: прогрессирующее течение артрозов и спондиллеза вне периода обострения, выраженные фиброзные и костные изменения, разрастание соединительной ткани в области сустава, сочетающиеся с нарушениями местного кровообращения в конечностях, проявляющимися зябкостью, онемением и похолоданием стоп, икр. Никотиновая кислота обладает выраженным сосудорасширяющим воздействием. Методику выполняют по п.1.1., однако под электрод-катод (-) помещают лекарственную прокладку, смоченную 0.5% водным раствором никотиновой кислоты в количестве 2-8 мл, в зависимости от калибра пораженного сустава. Продолжительность процедуры – 15-30 мин. Курс – 10-20 ежедневных процедур.

1.9. Электрофорез алоэ или грязевых отжимов. Показания: прогрессирующее течение артрозов и спондиллеза вне периода обострения, болевой синдром, выраженные фиброзные и костные изменения, разрастание соединительной ткани в области сустава, нарушениями местного кровообращения, дистрофические изменения. Алоэ, лечебная грязь и ее компоненты обладают трофическим и рассасывающим воздействием, улучшают питание и кровобращение тканей, снимают боли. Методику выполняют по п.1.1., однако под оба электрода – анод и катод (между электродом и телом) помещают лекарственные прокладки, смоченные экстрактом алоэ, разведенным в 4 раза водой или нативным отжимом лечебной грязи, полученным при помощи марлевой салфетки, в количестве 5-15 мл, в зависимости от калибра пораженного сустава. Продолжительность процедуры – 15-30 мин. Курс – 10-20 ежедневных процедур.

1.10. Электрофорез лечебной грязи (электрогрязелечение). Показания: прогрессирующее течение артрозов и спондиллеза вне периода обострения, болевой синдром, выраженные фиброзные и костные изменения, разрастание соединительной ткани в области сустава, нарушения местного кровообращения, дистрофические изменения. Лечебные грязи обладают трофическим и рассасывающим воздействием, улучшают питание и кровообращение тканей, снимают боли. Применяют фасованную гитиевую грязь месторождения “Сестрорецкий курорт”. Различные лечебные компоненты грязи обладают биполярной подвижностью в электрическом поле, поэтому электрофорез грязи проводят с обоих электродов – катода (-) и анода (+). Методику выполняют по п.1.1., однако под оба электрода – анод и катод помещают грязевые лепешки, обернутые в 3-4 слоя марли. Толщина грязевой лепешки 1,5-2 см, температура грязи 40-42оС. Продолжительность процедуры – 15-30 мин. Курс – 10-20 ежедневных процедур.

1.11. Электрофорез бишофита. Показания: см. п.1.10. Бишофит – природный минерал, продукт донных отложений, добываемый в Волгоградской области. Содержит комплекс минеральных солей с высоким содержанием Ca 2+, Mg 2+, K+, Cl-, HCO 3-, HSO 4-. Добывается в Волгоградской области. Применяется для лечения методом аппликаций (компрессов), обладает электрофоретичностью, вводится гальваническим током с обоих полюсов (с катода и с анода). Бишофит обладает трофическим и рассасывающим воздействием, улучшает питание и кровобращение тканей, уменьшает выраженность болей. Методику выполняют по п.1.1., однако под оба электрода – анод и катод помещают лекарственные прокладки, смоченные 10% водным раствором бишофита. После процедуры электрофореза кожу в зоне воздействия не очищают и не промывают от солевой “мантии”, а напротив – покрывают чистыми марлевыми салфетками и укутывают на 2-8 часов. Продолжительность процедуры – 15-30 мин. Курс – 10-20 ежедневных процедур.

Электрофорез – метод, сочетающий действие на организм постоянного тока и вводимых с его помощью лекарственных средств. При этом фармацевтический препарат попадает через кожу непосредственно в болезненную область, минуя желудочно-кишечный тракт, без нарушения кожных покровов. Введение лекарственных средств в тело методом электрофореза — это самый безопасный способ лекарственной терапии. 

ЭЛФОР-ПРОФ разработан на базе новейших технологий и достижений цифровой электронной техники и предназначен для применения в физиотерапевтических кабинетах. 

АППАРАТ «ЭЛФОР-ПРОФ» может применяться для лечения и профилактики широко спектра заболеваний. Лекарственный электрофорез хорошо переносят люди разного возраста, в том числе дети, а также лица пожилого и старческого возраста. Лекарственный электрофорез не дает аллергических реакций и других побочных эффектов, характерных для лекарственной терапии. Поэтому особенно показано применение «ЭЛФОР-ПРОФ» людям, страдающим аллергией. 

АППАРАТ «ЭЛФОР-ПРОФ» используется для проведения процедур лекарственного электрофореза. Это сочетанное воздействие гальваническим током и лекарственным веществом. Гальванический ток обладает самостоятельным лечебным действием — умеренным обезболивающим, сосудорасширяющим, трофическим и противовоспалительным. В то же время он вызывает перемещение частиц лекарственного вещества с лечебных электродов в организм пациента. Молекулы лекарственного вещества распределяются по организму и оказывают присущее им лечебное действие. Чаще всего применяют электрофорез обезболивающих (новокаин, анальгин) и сосудорасширяющих (никотиновая кислота, нош па) лекарственных препаратов. 

В гинекологии ЭЛФОР-ПРОФ применяется при: невынашивании беременности, нарушениях менструального цикла, менструальном и климактерическом синдромах, бесплодии, токсикозе, генитальном инфантилизме, при болях, спаечном процессе, хроническом воспалении придатков и матки, послеоперационном периоде реабилитации. Снимает спазм сосудов и гладкой мускулатуры, что улучшает кровоснабжение тканей, рассасывание рубцов, спаек, контрактур, оказывает обезболивающий эффект.
   
При лечении хронических простатитов эффективность лечения повышается в десятки раз.

В косметологии ЭЛФОР-ПРОФ применяется при: заболеваниях кожи, всех видах себореи, сухой и увядающей коже, жирной, подверженной угревой сыпи коже, постугревых рубцах, всех видах аллопеции, розацеи, гиноидной липодистрофии (целлюлит). Улучшает трофику тканей, удаляет продукты метаболизма из патологических очагов, ликвидирует инфильтрацию при воспалительных процессах, стимулирует размягчение и рассасывание рубцов, регенерацию поврежденных тканей, нормализует нарушенные функции, повышает защитную функцию кожи, белковый и углеводный обмен.

Есть противопоказания. Посоветуйтесь с врачом. Возможен вред здоровью.

Неврологическое | РОСТОВСКАЯ ОБЛАСТНАЯ КЛИНИЧЕСКАЯ БОЛЬНИЦА

Попала в ГБУ РО РОКБ с ковидом 19.10.20 (65 лет, ИБС, стентирование, РМЖ, лучевая терапия. Одним словом, полный комплект. В больницах полежала, могу сравнивать).
Больница начала работать как госпиталь всего неделю. Положили в реанимацию! Моментально была подключена к кислороду. Капельница круглосуточно, сатурация постоянно. Каждый час вводили препараты. И не только мне. Все пациенты, здесь лежащие, находились под пристальным внимаем врачей и сестер. С нас буквально не сводили глаз!!! Работают в защитных костюмах, в шлемах, без воды. Я была в недоумении от самоотверженности и мужества этих людей! Потом узнала, что некоторые врачи, зная свои хронические диагнозы, не отказались от красной зоны, но пошли работать, спасать людей. Один из ведущих реаниматологов (ЕИ) тяжело заболел, за его жизнь боролись коллеги, переживали и мы, пациенты. Слава Богу! Жив! Здоровья вам, ЕИ.
В реанимации у меня начался жуткий кашель, буквально разрывающий мои легкие изнутри. Мне принесли больничный ингалятор, 2 ингаляции с пульмикортом и 2 с гепарином. Через 2 дня кашель купировали.
Мое состояние быстро стабилизировали, через несколько дней перевели в инфекционное отделение.
Боялась уходить из реанимации, так как знаю, что работают врачи в красной зоне по 6 часов, меняются, приходит новый, кто будет вникать в мои сопутствующие!? Оказалось, каждый день работает врач, твой врач. Он лично занимается тобой, обследованием, делает назначения и т.д. как в любой др больнице. После 15.00 и 9 вечера еще два обхода дежурных врачей с измерением температуры, АД, сатурации и т.д. Пожалуйста, предъявляйте жалобы, консультируйтесь, получайте ответы на все вопросы.
Кислород со всех палатах! Вода стоит в неограниченном количестве и на тумбочках и в холлах на все столах. Питание подается из пищеблока в одноразовых контейнерах, очень хорошего качества!!!
Есть отдельно процедурная медсестра, работающая также каждый день. Больные с катетерами, что облегчает дежурным ставить капельницы, делать в/в. Препараты все есть!!!
Всю ночь сестры не отходят от тяжелых больных, следят за кислородными масками. В любой момент вызывают врача!
Не могу не отметить, что кровати новые, матрасы хорошего качества. Очень хорошего качества новейшее постельное белье, полотенца. Кстати, в приемнике меня переодели в новенький х/б костюм, как и всех остальных. От перовых подушек идеального качества я вообще в восторге (везде дешевый синтепон). Наблюдала за больными. 2-3 дня в палате на кислороде, капельницах. На 4-5 день уже принял душ, переоделся, ходит чистенький, делает легкую дыхательную гимнастику.
Когда заболела, больше всего боялась попасть в стационар, прослышав о лежании в коридоре и т.д. Здесь же получила выздоровление и еще столько положительных эмоций!!!
Жаль, что сюда нельзя родственникам, хочется показать чистоту! Отделение очень чистое, две санитарки постоянно моют и обрабатывают. В каждой палате кварц! Раньше я думала, что так чисто бывает только в операционных!
После выписки долечиваться в своей поликлинике (где был поставлен ОРВИ) — это значит лечиться самой по интернету. Высказала свои опасения лечащему врачу. На что получила ее телефон, ободрение, что буду с ней на связи, и она мне во всем поможет!!! Люди, вы где-нибудь такое видели? Слышали!? Только благодарность и слезы благодарности!!! Поговорила с пациентами, оказывается, многим дала телефон. И здесь вечером больные звонят ей. Милая Оксана Юрьевна! Вы настоящий врач! Вы любите лечить!!! Восхищаюсь мужеством этих людей! Как им тяжело в костюмах, хочется пить! Но не жалуются! Уже привыкли, говорят, приспособились!
Хочется благодарить и благодарить вас, дорогие наши медики, наши спасители за ваш труд! Вы настоящие герои! Дай Бог вам здоровья и защити вас от этой заразы!
Спасибо и администрации, что смогли так быстро организовать и сделать такой замечательный госпиталь!!!

Пенсионер Кузнецова Вера Ивановна.

Семейная медицина > Индивидуальные программы реабилитации после Covid 19

Реабилитация после Covid 19

Для многих пациентов, переболевших коронавирусной инфекцией, возвращение к обычной жизни проходит непросто.

Многие, даже молодые пациенты, отмечают постоянную усталость, утомляемость, слабость и одышку.

В «Cемейной медицине» разработаны алгоритмы, по которым создается индивидуальная программа реабилитации после Covid 19 для каждого отдельного пациента с учетом его особенностей, тяжести перенесенного заболевания, осложнений и наличия хронических заболеваний.

В восстановительном периоде используются методы лечения с применением лекарств (витаминотерапия, антиоксиданты, сорбенты) и без применения лекарств: физиотерапия (УВЧ-терапия, магнитотерапия, различные варианты лекарственного электрофореза, импульсная электротерапия, массаж, иглорефлексотерапия.

Все перечисленное позволяет улучшить микроциркуляцию в поврежденных тканях, способствует ускорению рассасывания инфильтративных изменений и восстановлению работы дыхательной мускулатуры, оказывает мощное противовоспалительное действие, предотвращает возникновение спаечного процесса в легких и других органах.

Персональная программа реабилитации создается для каждого пациента индивидуально, при первом посещении, разрабатывается врачом-терапевтом совместно с врачом- физиотерапевтом, курс восстановительных процедур может иметь различную продолжительность.

 

Индивидуальные программы реабилитации после Covid 19

Консультация терапевта первичная 1 000 ₽
Консультация физиотерапевта, КМН Бесплатно
Консультация терапевта повторная Бесплатно

Процедуры (1 сеанс)

Рефлексотерапия 500 ₽
Электрофорез лекарственный 160 ₽
Магнитотерапия 160 ₽
Массаж спина + руки 850 ₽
Массаж спина + грудь 950 ₽
Массаж шейно-воротниковой зоны + руки 600 ₽
Кинезиотейпирование (снятие мышечных спазмов 1 зона) 500 ₽
Динамическое тейпирование (лимфодренажная аппликация 1 зона) 600 ₽
Баночный массаж, спина 500 ₽
Постуральный массаж 400 ₽
Лимфодренажный массаж 700 ₽

 

Наши специалисты:

 

Тамара Давидовна Бестаева — врач — терапевт, ревматолог

Лариса Магометовна Басиева- врач- физиотерапевт, к.м.н., доцент кафедры медицинской реабилитации

Залина Владимировна Гиоева, врач-рефлексотерапевт, невролог

Олег Алиханович Губаев, массажист

 

Записаться на консультацию по вопросам реабилитации после COVID 19 можно по тел. 8(8672) 40-42-03.

Жалобы, клинические проявления после Covid 19

Физиотерапевтический комплекс

Ожидаемый результат после прохождения программы реабилитации

Жалобы, клинические проявления после Covid 19

Длительный кашель с трудно отделяемой мокротой

Физиотерапевтический комплекс

УВЧ-терапия. Лекарственный электрофорез натрия, магния, эуфиллина, лидазы, иода, гепарина.
Постуральный дренаж. Различные методики дыхательной гимнастики.
Классический ручной массаж, точечный, вибрационный баночный массаж.

Ожидаемый результат после прохождения программы реабилитации

Процедура УВЧ вызывает расширение капилляров легких в 3-10 раз, увеличивает газообмен в легочной ткани, усиливает кровообращение и лимфоотток. Происходит уменьшение эксудации, отечности, уменьшение роста бактерий, улучшается общее состояние. Курс 5-8 процедур.
Рекомендуемые варианты лекарственного электрофореза (который вам выберет физиотерапевт) окажут противовоспалительное и одновременно бронхолитическое действие Назначают курс из 10-15 ежедневных процедур.

Жалобы, клинические проявления после Covid 19

Затруднение дыхания, одышка, чувство нехватки воздуха, особенно, у ослабленных пациентов с сопутствующими заболеваниями сердечно-сосудистой системы, пожилых людей.

Физиотерапевтический комплекс

ПеМП-низкочастотное переменное магнитное поле.
Электрофорез эуфиллина, никотиновой кислоты, атропина. кальция, магния, иода, гепарина, димедрола
Для активации дренажной функции показано применение синусоидальных модулированных токов (СМТ или амплипульстерапия).
Постуральный дренаж и дренажная гимнастика.
Классический ручной массаж, точечный, вибрационный баночный массаж.
Метод волевой ликвидации глубокого дыхания К.П. Бутейко (ВЛГД). Парадоксальная дыхательная гимнастика А.Н. Стрельниковой.

Ожидаемый результат после прохождения программы реабилитации

Под влиянием МП происходит активация противосвертывающей системы крови, уменьшение внутрисосудистого пристеночного тромбообразования, достигается хороший противовоспалительный эффект, восстанавливается иммунитет.
Активизируется дренажная функция бронхов. В сочетании с лекарственным электрофорезом на область грудной клетки устраняет спазм и улучшает отхождения мокроты.

Жалобы, клинические проявления после Covid 19

Затруднение дыхания, одышка, чувство нехватки воздуха, повышение артериального давления

Физиотерапевтический комплекс

ПеМП-низкочастотное переменное магнитное поле.
Электрофорез никотиновой кислоты, эуфиллина, папаверина, дибазола, магния сульфат.
Различные методики дыхательной гимнастики.
Классический ручной массаж.

Ожидаемый результат после прохождения программы реабилитации

Под влиянием МП происходит активация противосвертывающей системы крови, уменьшение внутрисосудистого пристеночного тромбообразования, достигается хороший противовоспалительный эффект, восстанавливается иммунитет.
Электрофорез сосудорасширяющих препаратов позволяет снизить артериальное давление, улучшить мозговое кровообращение
Под влиянием массажа также активизируется дренажная функция бронхов, улучшается кровообращение, оказывается седативный эффект. В сочетании с лекарственным электрофорезом на область грудной клетки устраняет спазм и улучшает отхождения мокроты.

Жалобы, клинические проявления после Covid 19

Затруднение дыхания, одышка, чувство нехватки воздуха, головные боли, головокружения, шум в голове.

Физиотерапевтический комплекс

ПеМП-низкочастотное переменное магнитное поле.
Электрофорез никотиновой кислоты по воротниковой методике, электрофорез но-шпы. Сочетанный магний-бром электрофорез
Различные методики дыхательной гимнастики. Классический ручной массаж.

Ожидаемый результат после прохождения программы реабилитации

Под влиянием МП происходит активация противосвертывающей системы крови, уменьшение внутрисосудистого пристеночного тромбообразования, достигается хороший противовоспалительный эффект, восстанавливается иммунитет.
Электрофорез никотиновой кислоты, но-шпы позволяет улучшить мозговое кровообращение. Введение со второго электрода р-ра брома окажет седативный эффект.
Под влиянием массажа также активизируется дренажная функция бронхов, улучшается кровообращение органов грудной клетки, мозговое кровообращение, оказывается седативный эффект.

Жалобы, клинические проявления после Covid 19

Затруднение дыхания, одышка, чувство нехватки воздуха, нарушение сна, раздражительность, возбуждение.

Физиотерапевтический комплекс

ПеМП-низкочастотное переменное магнитное поле.
Сочетанный магний-бром электрофорез, электрофорез трентала.
Классический ручной массаж.

Ожидаемый результат после прохождения программы реабилитации

Под влиянием МП происходит активация противосвертывающей системы крови, уменьшение внутрисосудистого пристеночного тромбообразования, достигается хороший противовоспалительный эффект, восстанавливается иммунитет.
Сочетанный магний-бром электрофорез, электрофорез трентала.
Электрофорез трентала будет способствовать улучшению церебральной микроциркуляции путём снижения тромбогенного потенциала, повышению активности фибринолитической системы, устранению реологических расстройств.
Под влиянием массажа также активизируется дренажная функция бронхов, улучшается кровообращение органов грудной клетки, мозговое кровообращение, оказывается седативный эффект.

Жалобы, клинические проявления после Covid 19

Затруднение дыхания, одышка, чувство нехватки воздуха, гипертоническая болезнь в сочетании с атеросклерозом мозговых сосудов

Физиотерапевтический комплекс

ПеМП-низкочастотное переменное магнитное поле.
Элетрофорез магния, иода по воротниковой методике, аминалон-электрофорез по эндоназальной методике.

Ожидаемый результат после прохождения программы реабилитации

Под влиянием МП происходит активация противосвертывающей системы крови, уменьшение внутрисосудистого пристеночного тромбообразования, достигается хороший противовоспалительный эффект, восстанввливается иммунитет.
Элетрофорез магния, иода по воротниковой методике, аминолон-электрофорез по эндоназальной методике позволят добиться сосудорасширяющего, гипотензивного, седативного и нейротрофического эффекта
Под влиянием массажа также активизируется дренажная функция бронхов, улучшается кровообращение органов грудной клетки, мозговое кровообращение, оказывается седативный эффект.

Жалобы, клинические проявления после Covid 19

Затруднение дыхания, одышка, чувство нехватки воздуха, нарушение свёртывающей системы крови, с тенденцией с гиперкоагуляцией

Физиотерапевтический комплекс

ПеМП-низкочастотное переменное магнитное поле.
Гепарин-электрофорез на воротниковую область.
Электрофорез трентала

Ожидаемый результат после прохождения программы реабилитации

Под влиянием МП происходит активация противосвертывающей системы крови, уменьшение внутрисосудистого пристеночного тромбообразования, достигается хороший противовоспалительный эффект, восстанавливается иммунитет.
Электрофорез гепарина позволит улучшить реологические свойства крови, предотвратить тромбообразование. Электрофорез трентала будет способствовать улучшению церебральной микроциркуляции путём снижения тромбогенного потенциала, повышению активности фибринолитической системы, устранению реологических расстройств.

Публикации в СМИ

Хронический фарингит (ХФ) — хроническое воспаление слизистой оболочки глотки, развивающееся как следствие острого воспаления при неадекватном лечении и неустранённых этиологических факторах.

Классификация по патоморфологическим изменениям  Катаральный ХФ (простой) — стойкая диффузная венозная гиперемия, отёк слизистой оболочки, расширение и стаз вен малого калибра, расширение выводных протоков и гиперсекреция слизистых желёз  Гипертрофический ХФ — замена цилиндрического мерцательного эпителия кубическим или плоским, эпителий десквамируется, образует выросты, кистозные расширения и углубления, напоминающие лакуны миндалин. Сосуды малого калибра расширены, периваскулярная клеточная инфильтрация. Подслизистый слой утолщён, инфильтрирован  Атрофический ХФ — чаще возникает как проявление атрофического ринита и характеризуется резким истончением слизистой оболочки глотки, десквамацией эпителиального покрова с трансформацией цилиндрического эпителия в многослойный плоский и уменьшением количества слизистых желёз, облитерацией их каналов, гипосекрецией.

Факторы риска  Курение, алкоголизм, загазованность и запылённость воздуха (заболеваемость в городской местности выше, чем в сельской), в т.ч. на производстве  Очаги хронической инфекции в полости носа, околоносовых пазухах, глотке, полости рта, нарушения носового дыхания  Заболевания ССС и мочеполовой системы, ЖКТ, нарушения обмена веществ, гиповитаминозы.

Клиническая картина  Сухость, першение, ощущение инородного тела в горле, кашель  Слезотечение  Отхождение вязкого секрета, особенно по утрам  Нередко жалобы не соответствуют фарингоскопической картине — могут быть незначительными или отсутствовать при выраженных изменениях слизистой оболочки глотки и наоборот.

Фарингоскопия  Катаральный ХФ — гиперемия, небольшая отёчность и утолщение слизистой оболочки глотки, местами поверхность её задней стенки покрыта прозрачной или мутной слизью  Гипертрофический ХФ — слизистая оболочка гиперемирована, утолщена, мягкое нёбо и нёбный язычок отёчны, выраженные застойные явления (прослеживаются поверхностные ветвящиеся вены), слизь на задней стенке глотки •• Боковой ХФ — гипертрофия лимфаденоидной ткани в боковых складках глотки, позади нёбно-глоточных дужек, нередко нёбные и язычные миндалины воспалены (очаг хронического воспаления — этиологический фактор) •• Гранулёзный ХФ характеризуется наличием округлых или продолговатых лимфаденоидных образований красного цвета величиной 1–5 мм в виде красных гранул на задней стенке глотки  Атрофический ХФ — истончение и сухость слизистой оболочки: она может быть бледно-розовой или блестящей «лаковой», местами покрыта вязким гнойным секретом или корками.

Лабораторные исследования — см. Фарингит острый.

ЛЕЧЕНИЕ амбулаторное  Нераздражающая пища  Ингаляции щелочные, масляные, травяные  Прижигание гранул и боковых валиков глотки (при гипертрофическом ХФ) •• Медикаментозный способ — серебра нитрат 10–20% р-р, трихлоруксусная кислота •• Физический способ — гальванокаустика и криотерапия  Щелочные водно-глицериновые полоскания глотки и массаж её задней стенки с р-ром Люголя в глицерине при атрофической форме  Местное введение биостимуляторов в боковые валики глотки  Физиотерапия: электрофорез с никотиновой кислотой на подчелюстную область, индуктотермия, магнитотерапия и низкоэнергетический лазер, грязевые аппликации в виде «ошейника»  Ингаляции протеолитических ферментов  Санаторно-курортное лечение в условиях влажного климата с наличием грязевых и сероводородных ресурсов.

Сокращение. ХФ — хронический фарингит.

МКБ-10  J31.2 Хронический фарингит

ПРАЙМ PubMed | [Последовательное использование криотерапии и электрофореза никотиновой кислоты синусоидальными модулированными токами в лечении пациентов с остеохондрозом шейного отдела позвоночника]

Цитата

Кученик С.Г., Кубалова М.Н. «[Последовательное использование криотерапии и электрофореза никотиновой кислоты синусоидально модулированными токами в лечении пациентов с остеохондрозом шейного отдела позвоночника]». Вопросы курортологии, Физиотерапия, И Лечебной Физической Культуры, 1998, с.23-5.

Кучжник С.Г., Кубалова М.Н. [Последовательное использование криотерапии и электрофореза никотиновой кислоты синусоидальными модулированными токами в лечении пациентов с остеохондрозом шейного отдела позвоночника]. Вопр Курортол Физиотер Лех Физ Культ . 1998.

Кучейник С.Г., Кубалова М.Н. (1998). [Последовательное использование криотерапии и электрофореза никотиновой кислоты синусоидальными модулированными токами в лечении пациентов с остеохондрозом шейного отдела позвоночника]. Вопросы Курортологии, Физиотерапии, И Лечебной Физической Культуры , (2), 23-5.

Кучжник С.Г., Кубалова М.Н. [Последовательное использование криотерапии и электрофореза никотиновой кислоты синусоидальными модулированными токами в лечении пациентов с остеохондрозом шейного отдела позвоночника]. Вопр Курортол Физиотер Лех Физ Культ. март-апрель 1998 г .; (2) 23-5. PubMed PMID: 9643141.

TY — JOUR Т1 — [Последовательное использование криотерапии и электрофореза никотиновой кислоты синусоидальными модулированными токами при лечении пациентов с остеохондрозом шейного отдела позвоночника].AU — Kucheĭnik, S G, АУ — Кубалова М Н, PY — 1998/6/27 / pubmed PY — 1998/6/27 / medline PY — 1998/6/27 / entrez СП — 23 EP — 5 JF — Вопросы курортологии, физиотерапии, и лечебной физической культуры. JO — Вопр Курортол Физиотер Лех Физ Культ ИС — 2 СН — 0042-8787 UR — https://www.unboundmedicine.com/medline/citation/9643141/[the_sequential_use_of_cryotherapy_and_the_electrophoresis_of_nicotinic_acid_by_sinusoidal_modulated_currents_in_the_treatment_of_vostents_the_treatment_of_vostents_the_the_treatment_of_vostents_the_the_treatment_of_vostents_the_the_treatment_of_vostents_the_the_treatment_of_vostents_the_the_treatment_of_vostents_the_the_treatment_of_vostents_the__ L2 — https: // medlineplus.gov / Neckinjuriesanddisorders.html БД — ПРЕМЬЕР DP — Unbound Medicine ER —

Влияние комплексного применения электрофореза никотиновой кислоты и воздушных пузырьковых ванн на микроциркуляцию у пациентов с диабетической полинейропатией

Связанные концепции

Бальнеотерапия КупаниеДиабет, инсулиннезависимыйДиабетический сахарный диабет, неинсулинозависимыйДиабетическая полинейропатия 9000-Доппендиенез

00-Дугомагистология

COVID-19

Коронавирусы включают большое семейство вирусов, вызывающих простуду, а также более серьезные заболевания, такие как продолжающаяся вспышка коронавирусной болезни 2019 г. (COVID-19; формально известная как 2019-nCoV).Коронавирусы могут передаваться от животных человеку; симптомы включают жар, кашель, одышку и затрудненное дыхание; в более тяжелых случаях заражение может привести к летальному исходу. Этот канал охватывает недавние исследования COVID-19.

Бластомикоз

Бластомикоз Грибковые инфекции распространяются при вдыхании спор Blastomyces dermatitidis. Ознакомьтесь с последними исследованиями грибковых инфекций бластомикоза здесь.

Комплекс ядерных пор в ALS / FTD

Изменения в ядерно-цитоплазматическом транспорте, контролируемом комплексом ядерных пор, могут быть вовлечены в патомеханизм, лежащий в основе множественных нейродегенеративных заболеваний, включая боковой амиотрофический склероз и лобно-височную деменцию.Вот последние исследования комплекса ядерных пор при ALS и FTD.

Применение молекулярного штрих-кодирования

Концепция молекулярного штрих-кодирования заключается в том, что каждая исходная молекула ДНК или РНК прикрепляется к уникальному штрих-коду последовательности. Считывания последовательностей с разными штрих-кодами представляют разные исходные молекулы, в то время как считывания последовательностей с одинаковым штрих-кодом являются результатом дублирования ПЦР с одной исходной молекулы. Ознакомьтесь с последними исследованиями в области молекулярного штрих-кодирования здесь.

Синдром хронической усталости

Синдром хронической усталости — заболевание, характеризующееся необъяснимой инвалидизирующей усталостью; патология которого не до конца изучена.Узнайте о последних исследованиях синдрома хронической усталости здесь.

Развитие плюрипотентности

Плюрипотентность означает способность клетки развиваться в три первичных слоя зародышевых клеток эмбриона. Этот канал посвящен механизмам, лежащим в основе эволюции плюрипотентности. Вот последнее исследование.

Вариагация эффекта положения

Вариагация эффекта положения Возникает, когда ген инактивирован из-за его расположения вблизи гетерохроматических областей в хромосоме.Ознакомьтесь с последними исследованиями вариагации эффекта позиции здесь.

Агонисты рецепторов STING

Стимуляторы генов IFN (STING) представляют собой группу трансмембранных белков, которые участвуют в индукции интерферона I типа, важного для врожденного иммунного ответа. Стимуляция STING была активной областью исследований в лечении рака и инфекционных заболеваний. Вот последние исследования агонистов рецепторов STING.

Микробицид

Микробициды — это продукты, которые можно наносить на поверхности слизистой оболочки влагалища или прямой кишки с целью предотвращения или, по крайней мере, значительного снижения передачи инфекций, передаваемых половым путем.Вот последние исследования микробицидов.

Сопутствующие статьи

Biochimica Et Biophysica Acta

H HOLZERH GRISEBACH

Lo sperimentale

P CHIARINI, F MELANI

Fysiatrický a reumatologic 9000 MELANI

Fysiatrický a reumatologicky 9000 9000 MELANI 9000 MELANI 9000 9000 MJ 9000 9000 Jünatologicky Vest Pou

Pain

Sandra Sif GylfadottirNanna Brix Finnerup

Применение метода CZE в рутинном анализе для определения витаминов B-комплекса в фармацевтических и ветеринарных препаратах

Конкурентоспособный метод CZE для анализа контроля качества поливитаминных препаратов, содержащих B, и ветеринарных продуктов -группа витаминов.Представляющими интерес витаминами являются гидрохлорид тиамина (B 1 ), хлорид монофосфата тиамина (B 1a ), рибофлавин (B 2 ), рибофлавин-5’монофосфат (B 2a ), никотинамид (B 3 ). , кальциевая соль d-пантотеновой кислоты (B 5 ), гидрохлорид пиридоксина (B 6 ), фолиевая кислота (B 9 ) и 4-аминобензойная кислота (B 10 ). Эти аналиты разделяли с оптимизацией экспериментальных условий в 20 мМ тетраборатном буфере в качестве BGE (фонового электролита) на приборе Beckman P / ACE System MDQ с использованием капилляра из плавленого кварца без покрытия.Эффективная длина капилляра составляла 49,5 см, мкм, м, приложенное напряжение 20 кВ и температура 25 ° C. Детектирование проводилось диодно-матричным детектором при 214 нм для всех витаминов, кроме B 5 (190 нм. ) и B 2a (260 нм). Время разделения составляло около 9 мин. После оптимизации экспериментальных условий предложенный метод прошел валидацию. Точность времени миграции и скорректированная площадь пика, диапазон линейности, LOD и LOQ, точность (извлечение), надежность и износостойкость были оценены для каждого аналита, демонстрируя хорошую надежность метода.Были проведены анализы реальных фармацевтических образцов, которые подтвердили универсальность этого метода.

1. Введение

Контроль качества (КК) играет важную роль в фармацевтической промышленности. Фактически, для оценки фармацевтических препаратов разрабатывается множество аналитических методов с использованием различных методик. Витамины группы B хорошо разделялись методом RP-HPLC. Метод одновременного определения таурина и 10 водорастворимых витаминов, включая витамин B 1 (тиамин), B 2 (рибофлавин), B 5 (пантотеновая кислота), B 6 (пиридоксин и пиридоксаль) , B 8 (биотин), B 9 (фолиевая кислота), C ​​(аскорбиновая кислота) и B 3 (никотинамид и никотиновая кислота) в поливитаминных таблетках.Обнаружение компонентов было ESI-MS [1]. Некоторые водорастворимые витамины, которые нас интересуют (аскорбиновая кислота, гидрохлорид тиамина, рибофлавин-5′-фосфат натрия, гидрохлорид пиридоксина, никотинамид и (+) — пантенол) и два консерванта (метилпарабен и бензоат натрия) в поливитаминном сиропе, хорошо себя чувствуют. разделены на колонке Zorbax SB-Aq (C18) [2]. Метод ВЭЖХ-УФ был разработан для одновременного определения восьми витаминов, включая B 1 , B 2 , B 3 , B 6 , B 9 , цианокобаламин, аскорбиновую кислоту в сухом детском молоке [ 3].Утвержденный метод ВЭЖХ-УФ для определения семи витаминов группы B (B 1 , B 2 , B 3 , B 6 , B 9 и цианокобаламин) в фармацевтических препаратах и ​​биологических жидкостях после проводилась твердофазная экстракция [4]. Одновременное определение водорастворимых и жирорастворимых витаминов в фармацевтических препаратах методом ВЭЖХ проводили за один цикл с использованием комбинированного изократического и линейного градиентного элюирования с подвижной фазой, состоящей из трифторуксусной кислоты и метанола.Метод применялся на реальном образце. Результаты хорошо согласуются с заявленными значениями. Проанализированные витамины: B 1 , B 2 , B 5 , B 6 , B 9 , B 3 и B 12 (цианокобаламин) [5].

Метод RP-ионной ВЭЖХ применялся для определения некоторых интересующих нас витаминов в поливитаминах с минералами от разных авторов. Для никотинамида, гидрохлорида пиридоксина, мононитрата тиамина и рибофлавина валидирован метод ВЭЖХ с использованием метанола 0.5% уксусная кислота в качестве подвижной фазы [6].

Был разработан и утвержден чувствительный метод RP-HPLC для одновременного определения B 1 , B 3 , B 6 и B 9 в таблетках, покрытых Pentovit. Процедуры проводили на колонке Supelcosil ABZ с метанолом, натриевой солью гептансульфоновой кислоты и триэтиламином в качестве подвижной фазы [7]. Для определения тиамина и рибофлавина в планшете Duoweiyuansu был разработан метод ВЭЖХ-УФ.Подвижная фаза состояла из ионно-парного реагента (содержащего 1-гексансульфонат, ледяную уксусную кислоту и триэтиламин) / метанол (80:20). Этот метод может быть использован для контроля качества тиамина и рибофлавина в таблетке Duoweiyuansu [8]. Существует много работ о витаминах группы B, анализируемых методом капиллярного электрофореза (КЭ) и его модификациях. Некоторые авторы изучали определение витаминов в продуктах питания на основе сверхкритической жидкостной экстракции до анализа отдельных компонентов мицеллярной электрокинетической капиллярной хроматографией (MEKC).Метод был оптимизирован с использованием холата натрия в качестве мицеллярной фазы для отделения 11 витаминов группы В, аскорбиновой кислоты и 4 примесей примерно за 25 мин [9]. Другие авторы исследовали с помощью анализа капиллярного зонного электрофореза (CZE) влияние низших органических спиртов в качестве дополнительных поверхностно-активных веществ (метанол, этанол, н-пропанол, изопропанол, пропандиол, н-бутанол и изоамиловый спирт) и н-гексана в качестве органического модификатора фосфатов. буфер с различной концентрацией SDS с использованием набора витаминов и п-гидроксибензойной кислоты в качестве тестовой смеси.Оптимальное разделение было достигнуто, в частности, при высоких концентрациях поверхностно-активного вещества [10]. CZE-анализ трех витаминов (B 1 , B 2 и B 6 в таблетках, полученный с использованием фосфатно-боратного буфера pH 9,0, короткое время анализа (5 мин) [11]. Год спустя те же авторы изучили другой специфический, точный, чувствительный и точный метод разделения тех же витаминов, получив высокую эффективность разделения и более короткое время анализа (3 мин) [12]. Четыре витамина B, такие как B 1 , B 2 , пиридоксаль, пиридоксин и пиридоксамин (B 6 ) в фармацевтическом продукте определяли одновременно с помощью CZE.Раствор HCl. использовался для извлечения витаминов из поливитаминно-мультиминеральной таблетки. В качестве БГЭ использовали натрий-фосфатный буфер (pH 9,0) [13].

Смесь четырех водорастворимых витаминов группы B анализировали как CZE, так и MECK. Количественные анализы различных фармацевтических составов сравнивали с методом ЖХ Фармакопеи США, получая хорошую корреляцию [14].

Разработаны экспресс-методы одновременного разделения пяти витаминов: B 1 , B 2 , B 6 , никотинамида, никотиновой и аскорбиновой кислот.Они были протестированы на 15 реальных образцах с хорошим разрешением по (CZE) и (MECC). CZE выполняли с 0,02 M боратным буфером, тогда как MECC в 0,02 M боратно-фосфатном буфере с 4% содержащим ацетонитрил. 0,1 М додецилсульфат натрия [15].

Некоторые авторы исследовали метод анализа шести водорастворимых витаминов (тиамин, никотинамид, рибофлавин, пиридоксин, пантотеновая и аскорбиновая кислоты) в фармацевтическом препарате, разработанный CZE. Хороший компромисс между разрешением, временем анализа и стабильностью аналита был получен при использовании 50 мМ буфера буры с pH 8.5. Этот метод CZE был очень полезен для разделения более сложных образцов, но цианокобаламин не мог быть отделен от никотинамида в этой системе CZE. Фактически, эти 2 соединения были незаряженными при используемом pH. Вместо этого они были разрешены MECC с использованием SDS в BGE. Хорошие результаты в отношении линейности, точности и точности были получены в диапазоне концентраций, изученном для 6 витаминов [16].

Есть некоторые исследования B-комплекса спектрофотометрическими методами.

Было проведено спектрофотометрическое определение тройных смесей тиамина, рибофлавина и пиридоксаля в фармацевтической плазме и плазме человека с помощью машин с опорными векторами наименьших квадратов.Моделирование методом частичных наименьших квадратов (PLS) и машины опорных векторов наименьших квадратов использовались для многомерной калибровки спектрофотометрических данных [17]. Та же процедура была успешно применена для определения B 1 , B 2 , B 3 и B 6 в фармацевтических препаратах другими авторами [18].

Одновременное определение четырнадцати водорастворимых витаминов (13 из группы B и витамин C) в выбранных пищевых матрицах методом ЖХ / МС / МС описано в недавней статье [19].Аналиты были разделены менее чем за 10 минут с извлечением от 30% до 70%.

Процесс контроля качества в фармацевтической промышленности требует методов, которые могут определить за один проход большинство компонентов. Во многих случаях для определения всех компонентов поливитаминного фармацевтического препарата необходимо выполнять разные анализы с использованием разных методик.

Капиллярный электрофорез (КЭ) — это мощный аналитический метод, который широко используется в исследованиях и при контроле качества фармацевтических препаратов.Как показало изучение литературных данных, MEKC был единственным методом [9], способным разделить до 11 витаминов группы B. Другие методы КЭ дают возможность разделить только несколько (максимум 5) молекул этого класса. Нет публикаций об одновременном определении девяти витаминов группы B с помощью CZE, простейшей системы CE, которая предлагает несколько преимуществ по сравнению с ВЭЖХ, таких как быстрый анализ, более низкий расход растворителя, а затем более низкие затраты и незначительное воздействие на окружающую среду, а также более высокая эффективность.

С этой целью целью данной работы является разработка валидированного метода CZE для анализа многокомпонентных фармацевтических и ветеринарных препаратов в рутинных анализах.

2. Экспериментальная
2.1. Аппарат

Анализы проводили на системе P / ACE от Beckman Instrument Fullerton, Калифорния (США) с детектором UV-DAD. Для оценки прочности электрофоретическое разделение проводили на приборе SpectraPhoresis 1000 от Thermo-Quest Corporation, Калифорния (США).

Капилляр из плавленого кварца без покрытия ID = 50 мкм м, общая длина 59,5 см и эффективная длина 49,5 см был поставлен компанией SGE (Мельбурн, Австралия). Длина волны обнаружения была установлена ​​на 214 нм. Ввод образцов производился в гидродинамическом режиме (5 с при давлении 0,5 фунт / кв. Дюйм).

2.2. Химические вещества и материалы

Все реагенты были аналитической чистоты.

Бура, дигидрат гидрофосфата натрия, моногидрат дигидрофосфата натрия, хлорид калия и CTAB (бромид цетилтриметиламмония) были от FLUKA (Buchs, Швейцария).Фосфорная кислота, гидроксид натрия, хлорная кислота и ацетонитрил были поставлены Carlo Erba (Милан, Италия). Основание тризма (трис [гидроксиметил] аминометан), ЭДТА (этилендиаминтетрауксусная кислота). Бикарбонат натрия, лимонная кислота, щавелевая кислота и моногидрат битартрата натрия были от Sigma-Aldrich (Steinheim, Германия).

Реальные образцы представляли собой коммерчески доступные фармацевтические продукты: Berocca Plus (Bayer S.p.A), Gabbrovital B forte (CEVA VETEM SpA), Trinidex (LDB LAB.DIACO BIOMEDICALI SpA) и Biochetasi (Sigma-Tau SpA).Для фильтрации раствора использовали шприцевые фильтры 0,45 мкм мкм (Millex HV, Millipore, MA, USA).

2.2.1. Стандарты витаминов

гидрохлорид тиамина (B 1 ), тиаминпирофосфат хлорид (B 1a ), рибофлавин (B 2 ), рибофлавин-5’монофосфат (B 2a ), никотинамид (B 3 ), кальциевая соль d-пантотеновой кислоты (B 5 ), гидрохлорид пиридоксина (B 6 ), биотин (B 8 ), фолиевая кислота (B 9 ), B 10 (4-аминобензойная кислота). кислота), цианокобаламин (B 12 ), гидроксокобаламин (B 12a ) и 2-3 дигидроксибензойная кислота были приобретены у Fluka (Buchs, Швейцария).

2.3. Приготовление стандартных, буферных и реальных образцов

Стандартные исходные растворы исследуемых аналитов (при концентрации 1 мг / мл) готовили в дистиллированной воде, рибофлавин и фолиевую кислоту растворяли в 3 M и 2 M HCl соответственно

. калибровочные растворы получали разбавлением исходного раствора дистиллированной водой для получения желаемой концентрации аналита. Реальная подготовка образцов была разной для каждого продукта.

Для препарата Берокка Плюс двадцать таблеток взвешивали и растирали в ступке.Количество эквивалента порошка на одну таблетку взвешивали и растворяли в мерной колбе на 50 мл с дистиллированной водой. После обработки ультразвуком в течение 10 минут в ультразвуковой бане надосадочный раствор центрифугировали в течение 5 минут, а затем фильтровали через шприцевой фильтр 0,45 мкм мкм. Наконец, раствор разбавляли дистиллированной водой для достижения порядка концентрации внутри диапазона калибровки.

Для образца Trinidex раствор для внутривенной инъекции фильтровали через фильтр 0.45 мкм шприцевой фильтр м без разбавления и инъекции.

Для препарата Габбровитал ветеринарный раствор для внутримышечных инъекций был разбавлен 1: 1000 из-за его высокой концентрации, затем профильтрован и проанализирован.

Для образца Biochetasi порошок, содержащийся во флаконе для внутримышечной инъекции, разбавляли дистиллированной водой для достижения желаемой концентрации и затем фильтровали через шприцевой фильтр 0,45 мкм мкм.

3. Результаты и обсуждение
3.1. Разработка и оптимизация метода

Чтобы предложить подходящий метод для рутинного анализа, необходимо было оценить экспериментальные условия для наилучшего разрешения исследуемых аналитов.

Во-первых, из-за разной растворимости и стабильности для каждого витамина было протестировано множество условий их растворения. Были исследованы несколько параметров для анализа CZE, такие как состав и концентрация BGE, pH, условия впрыска, длины волн, приложенное напряжение и температура.

3.1.1. Влияние состава, концентрации и pH BGE

Буферный состав BGE является одним из наиболее важных параметров капиллярного электрофореза.

Чтобы добиться максимальной точности, необходимо очень тщательно выбирать буфер.

Большинство витаминов являются азотсодержащими протонными молекулами, поэтому отправной точкой этой работы было изучение низкого диапазона значений pH для их разделения.

На предварительном этапе исследования BGE тестировали pH в диапазоне от 1.5–4.2 и концентрациями от 20 до 50 мМ, представляют собой HCl / KCl, фосфат, фосфат-оксалат, фосфат с 5% ацетонитрила, фосфат с CTAB, фосфат-тартрат и тартрат.

Только в 20 мМ фосфатном буфере при pH = 2,3 хорошее разделение одиннадцати аналитов было достигнуто примерно за 23 минуты. На рисунке 1 аналиты с 1 по 7 являются катионами, остальные (8–10) находятся в анионной форме. В этих рабочих условиях накладываются рибофлавин (B 2 ) и цианокобаламин (B 12 ).Поскольку эти соединения часто содержатся в одном фармацевтическом препарате, определить их оба невозможно. Длительное время анализа, высокая сила тока и низкая повторяемость времени миграции (RSD% ~ 10%) не позволили предложить эту процедуру для рутинного анализа.


Следовательно, была оценена возможность разделения исследуемых витаминов в щелочных буферах.

Были исследованы

буферов BGE с pH от 8,5 до 9,3 в диапазоне концентраций от 20 мМ до 80 мМ: трис / HCl, бикарбонат / карбонат, трис / борат, борат, борат с EDTA и борат с CTAB.

Наилучшее разделение девяти витаминов было реализовано в 20 мМ боратном буфере при pH 9,2 примерно за 9 минут (рис. 2).


Пики симметричны, и базовая линия разрешена для отдельных витаминов группы B, за исключением кальциевой соли d-пантотеновой кислоты (B 5 ) и рибофлавин-5’монофосфата (B 2a ), которые подвергаются совместной элюции. Поскольку хороший компромисс между симметрией пика, разрешением и временем анализа привел к получению 20 мМ боратного буфера при pH = 9,2, эти экспериментальные условия были выбраны как оптимальные.

3.1.2. Влияние длины волны

В первую очередь необходимо было выбрать наиболее подходящую длину волны для одновременного обнаружения витаминов, поскольку спектральные свойства каждого из них достаточно различаются. УФ-спектры, полученные с помощью UV-DAD, показывают три длины волны, подходящие для количественного анализа. 214 нм для всех витаминов, за исключением кальциевой соли d-пантотеновой кислоты (B 5 ) и рибофлавин-5’монофосфата (B 2a ), которые накладываются друг на друга. Затем был проведен количественный анализ этих двух аналитов на длинах волн 190 и 260 нм, поскольку рассматриваемые соединения сами по себе не интерферируют.Фактически, витамин B 5 имеет максимум поглощения только при 190 нм, в то время как витамин B 2a имеет два максимума при 214 и 260 нм.

3.1.3. Влияние приложенного напряжения

Для оптимизации разделительного напряжения был проведен анализ в диапазоне приложенного напряжения от 10 до 30 кВ. При низком напряжении разделение всех аналитов достигалось, но время анализа увеличивалось до 20 мин с уширением пиков. Повышение напряжения (макс. 30 кВ) до оптимального значения приводит к 20 кВ, что дает силу тока 25 мкА и хорошую воспроизводимость.При 30 кВ разделение аналитов было неполным.

3.1.4. Влияние температуры

Повышение температуры (30 ° C) привело к сокращению времени анализа (уменьшение вязкости BGE). Желательно установить высокую температуру картриджа, но B-комплекс является термолабильным. Таким образом, подходящая температура для анализа этих соединений составила 25 ° C.

3.2. Валидация метода

Метод прошел валидацию в соответствии с рекомендациями ICH [20].

3.2.1. Прецизионность

Прецизионность оценивалась по RSD% времени миграции () и скорректированной площади пика () для внутридневного и межсуточного анализов. Для оценки точности в течение дня стандартные растворы с тремя уровнями концентрации (низкой, средней и высокой) вводили в один и тот же день. Для оценки межсуточной точности стандартные растворы анализировали в течение пяти дней подряд, выполняя пять последовательных инъекций каждый день. Рассчитанные значения RSD% приведены в таблице 1.

Внутри дневной 2 904,8

1 1,91

4,2

RSD% RSD%
Внутрисуточный Промежуточный Промежуточный Промежуточное

B 1 0,20 0,31 5,51 2.89 1,76 4,37
B 3 0,17 0,57 3,16 2,54 2,30 4,31
1,89 1,41 4,15
B 6 0,32 0,77 5,48 2,39 1,91 3,22
3,22
0,81 6,29 1,95 1,26 3,87
B 10 0,32 0,95 3,83 1,91 2,1
0,27 0,87 4,91 1,04 1,56 3,17
B 2a 0,34 0,57 5,00 2 59 1,51 4,91
SI 0,34 0,82 4,51 2,15 1,99 2,61
3 2,61
B

9401
B

9401
2,84 4,33

3.2.2. Диапазон калибровки

Линейность отклика детектора была протестирована в различных диапазонах, как указано в таблице 2.Для количественного анализа применялся метод внутреннего стандарта. За его свойства был выбран внутренний стандарт 3,4-дигидроксибензойной кислоты.

903 0,9952 7 7 900

Analyte Диапазон калибровки μ г / мл Уравнение


B 3 10–120 0.9931
B 2 5–40 0,9989
B 6 3–40 0,9993
0,9993
0,9956
B 10 3–25 0,9973
B 5 30–120 037,99
5–40 0.9972
B 9 5–30 0,9912

Было введено шесть стандартных растворов, содержащих девять представляющих интерес аналитов и внутренний стандарт. Калибровочные линии были построены на графике зависимости R (скорректированного отношения площадей) от концентрации стандартных растворов с использованием Microsoft EXCEL.

3.2.3. LOD и LOQ

LOD, самая низкая концентрация аналитов, которую можно отличить от шума, определяемая как отношение сигнал / шум S / N 3: 1, находилась в диапазоне от 0.9 μ г / мл до 9,0 μ г / мл.

LOQ, самая низкая концентрация аналитов, которая может быть количественно определена с хорошей точностью, определяемая как отношение сигнал / шум S / N 10: 1, находилась в диапазоне от 3,0 мк г / мл до 30,0 мк г / мл.

3.2.4. Анализ реальных образцов

Были проанализированы четыре фармацевтических препарата, содержащих комплекс витаминов группы В. Результаты экспериментов приведены в таблице 3. В фармацевтических растворах не наблюдалось никаких помех.RSD% времени миграции и скорректированные значения площади пика были ниже, соответственно, 0,5% и 3,0%. Типичная электрофореграмма коммерческого фармацевтического препарата (Berocca Plus) показана на рисунке 3.

903 3,2 Точность

Точность оценивалась анализами извлечения коммерческого продукта. После обогащения реальный образец подвергался анализу, и полученная концентрация сравнивалась с данными, полученными без обогащения.Полученные данные о извлечении составляют от 97,0 до 101,4%.

3.2.6. Прочность

Для этого были проведены измерения на приборе SpectraPhoresis 1000 в оптимальных экспериментальных условиях. В этом приборе другая форма картриджа, общая длина капилляра составляет 44 см, эффективная длина — 36 см (короче, чем оптимальная длина капилляра, используемого в приборе Бекмана). Следовательно, на этот прибор необходимо было подать более низкое напряжение (10 кВ).Электрофореграмма, полученная на этом аппарате при введении стандартной смеси в гидродинамическом режиме в течение 1 секунды, показана на рисунке 4. Повторяемость времени миграции составляет от 0,32% до 0,52%.


4. Заключение

Предложенный метод был разработан для одновременного определения девяти водорастворимых витаминов (B 1 , B 1a , B 2 , B 2a , B 3 , B 5 , B 6 , B 9 и B 10 ) в поливитаминных фармацевтических препаратах CZE.Наилучшее разрешение было получено примерно через 9 мин при использовании простого тетраборатного буфера 20 мМ, pH = 9,2 при 25 ° C и постоянного напряжения 20 кВ в капилляре из плавленого кварца без покрытия. Этот метод подходит для анализа витаминов группы B, что подтверждается подтверждением валидации: он точный, точный и надежный. Анализ реальных образцов подтвердил его применимость. Поскольку для этой процедуры не требуются дорогостоящие реагенты и предварительная обработка образцов, она представляет собой действенную альтернативу анализу контроля качества в фармацевтической промышленности.

Апоптоз нейтрофилов, опосредованный рецепторами никотиновой кислоты (GPR109A)

Реагенты

Крысиные mAb против GPR109A (HM74a) были получены от R&D Systems Europe Ltd. (Abingdon, UK). NA, FK-506 и циклоспорин A были получены от Sigma-Aldrich (Buchs, Швейцария). NA, конъюгированная с флуоресцеинизотиоцианатом (FITC), была синтезирована компанией Molecular Probes Europe BV (Лейден, Нидерланды). MAb против CD7 и CD36 для выделения незрелых нейтрофилов, mAb против Mcl-1, набор для обнаружения апоптоза аннексина V и все ингибиторы каспаз (z-VAD-fmk, z-DEVD-fmk, z-IETD-fmk, z -LEHD-fmk) были получены от BD Biosciences (Базель, Швейцария).Микрогранулы mAb против CD16 для выделения эозинофилов были от Miltenyi Biotec GmbH (Bergisch Gladbach, Германия). Поликлональные антитела против каспазы-3 и все антитела против плохих АБ были от Cell Signaling Technology Inc. (BioConcept, Allschwil, Швейцария). Поликлональные антитела против 14-3-3 β (К-19) были получены от Santa Cruz Biotechnology Inc. (Гейдельберг, Германия). MAb против глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы (GAPDH) было от Chemicon International Inc. (Juro, Люцерн, Швейцария). Вторичные антитела, конъюгированные с пероксидазой хрена (HRP), были получены от Amersham Bioscience Europe GmbH (Фрайбург, Германия).Конъюгированные с фикоэритрином (PE) и тетраметилродамином изотиоцианатом (TRITC) вторичные антитела осла против крысы были приобретены в Jackson ImmunoResearch Laboratories (Milan Analytica, La Roche, Switzerland). MAb против Fas (клон CH-11) было получено от MBL International Corporation (LabForce AG, Наннинген, Швейцария). PTX и фура-2-ацетоксиметиловый эфир (fura-2 / AM) были от Alexis (Лаузен, Швейцария). Человеческий ГМ-КСФ был приобретен у Novartis Pharma GmbH (Нюрнберг, Германия). db-cAMP был предоставлен Biomol Research Laboratories Inc.(Плимутское собрание, Пенсильвания, США). Fluo-3 / AM был от компании Molecular Probes (Юро, Люцерн, Швейцария). UTP был от Boehringer Mannheim (Мангейм, Германия). Все остальные химические вещества, если не указано иное, были произведены Sigma-Aldrich.

Клетки

Зрелые нейтрофилы крови выделяли из периферической крови здоровых доноров центрифугированием Ficoll-Hypaque. 11, 15, 35, 36 Вкратце, мононуклеарные клетки периферической крови разделяли центрифугированием на Ficoll-Hypaque (Seromed-Fakola AG, Базель, Швейцария).Нижнюю фазу, в основном гранулоциты и эритроциты, обрабатывали раствором для лизиса эритроцитов (155 ммоль / л NH 4 Cl, 10 ммоль / л KHCO 3 и 0,1 ммоль / л EDTA, pH 7,3). Полученные популяции клеток содержали более 95% зрелых нейтрофилов по оценке окрашивания с помощью Diff-Quik (Medion GmbH, Дюдинген, Швейцария) и анализа световой микроскопии.

Незрелые нейтрофилы выделяли из аспиратов костного мозга с нормальной клеточной морфологией и распределением, как описано ранее. 15, 16 Вкратце, после центрифугирования в двухступенчатом прерывистом градиенте плотности перколла клетки были отрицательно изолированы с использованием анти-CD7 и анти-CD36 mAb для устранения контаминирующих лимфоидных и эритроидных предшественников. Полученная популяция клеток содержала> 97% клеток линии нейтрофилов, как определено окрашиванием миелопероксидазой, проточно-цитометрическим анализом поверхностных белков, ассоциированных с клонами, 15 , а также с помощью Diff-Quik и световой микроскопии. Доля зрелых нейтрофилов была менее 5%.

Эозинофилы периферической крови контрольных индивидуумов очищали, как описано ранее. 37, 38 Полученные популяции клеток содержали более 99% эозинофилов, что контролировалось окрашиванием с помощью Diff-Quik и световой микроскопии.

Все лица, сдавшие кровь или аспират костного мозга, подписали письменное соглашение об информированном согласии в соответствии с Хельсинкской декларацией. Исследование было одобрено местным комитетом по медицинской этике (Kantonale Ethikkommission Bern).

Клеточные культуры

Нейтрофилы культивировали при 1 × 10 6 / мл в RPMI-1640, содержащем 1% фетальной телячьей сыворотки (FCS) и 200 МЕ / мл пенициллина / 100 μ г / мл стрептомицина (все от Life Technologies, Базель, Швейцария) в отсутствие или в присутствии указанных концентраций NA, FK-506, циклоспорина A, PTX, GM-CSF, ингибиторов каспаз и db-cAMP в течение указанных периодов времени. Если не указано иное, использовали NA в количестве 100 мкл. M. Клетки HL-60 культивировали в среде Искова, содержащей 10% FCS.

Анализ экспрессии на клеточной поверхности

Метод 1

Нейтрофилы окрашивали 2,5 мкг мкг / мл mAb против человеческого GPR109A или подобранным по изотипу контрольным mAb. Связывание первичных антител визуализировали с помощью конъюгированных с PE вторичных антител осла против крысиного антитела (1/100) с использованием проточного цитометрического анализа (FACS-Calibur, BD Biosciences).

Методы 2 и 3

Цитоспины свежих или культивированных нейтрофилов получали на предметных стеклах без покрытия. Клетки фиксировали в 4% параформальдегиде при комнатной температуре в течение 10 мин и трижды промывали PBS, pH 7.4. Для предотвращения неспецифического связывания слайды инкубировали в блокирующем буфере (25% иммуноглобулинов человека, 25% нормальной козьей сыворотки, 25% нормальной ослиной сыворотки и 25% BSA) при комнатной температуре в течение 1 часа. Непрямое иммуноокрашивание GPR109A проводили при комнатной температуре в течение 1 ч с 2,5 мкг мкг / мл анти-GRP109A или совпадающим по изотипу контрольным mAb. Затем клетки инкубировали с TRITC-конъюгированными вторичными антителами осла против крысиного антитела (1/100) в темноте при комнатной температуре в течение 1 часа. В других экспериментах клетки инкубировали с FITC-конъюгированной NA в течение 30 мин.Специфичность контролировали путем предварительной инкубации клеток с немеченой 1 мМ NA в течение 1 мин. В последних экспериментах ядра контрастировали иодидом пропидия. 39 Предметные стекла закрывали покровными стеклами и анализировали с помощью конфокальной лазерной сканирующей микроскопии (LSM 510, Carl Zeiss, Гейдельберг, Германия), оснащенной лазерами Ar и HeNe.

Измерения внутриклеточного кальция

Метод 1

Концентрации внутриклеточного ионизированного кальция ([Ca 2+ ] i ) анализировали с помощью спектрофлуориметрического анализа в массе с использованием спектрофлуориметра Perkin Elmer LS50, как описано ранее. 40, 41 В экспериментах с РТХ клетки предварительно инкубировали с ингибитором в указанных концентрациях и в течение указанного времени.

Метод 2

[Ca 2+ ] и также анализировали в отдельных клетках. Клетки (3 × 10 5 ) были иммобилизованы на предметных стеклах для микроскопии живых клеток 14 и загружены 10 μ M fluo-3 / AM в течение 30 мин. Присоединенные клетки тщательно промывали и добавляли 200 мкл мкл PBS с добавлением глюкозы (2 мМ).Измерения содержания кальция проводились в камере с 37 ° C с использованием конфокальной лазерной сканирующей микроскопии (LSM 510). Fluo-3-Ca 2+ возбуждали на длине волны 514 нм, и испускание флуоресценции регистрировали с использованием длиннопроходного фильтра 560 нм. Изображения были получены с помощью масляного иммерсионного объектива Zeiss с числовой апертурой 1,3 × 40. Одноплоскостные восьмибитные изображения размером 256 × 256 пикселей, представляющие 325,7 мкм м в каждом измерении, были записаны с интервалами 1,5 с. После запуска процесса регистрации применяли агонисты в указанных концентрациях.Из полученной серии изображений были рассчитаны интенсивности сигналов с использованием встроенного программного обеспечения количественного анализа LSM510 (Zeiss 510, версия 2.5).

Измерения цАМФ

Для повышения уровня цАМФ до детектируемых уровней добавляли ингибитор фосфодиэстеразы 3-изобутил-1-метилксантин (100 мкг М) на 10 мин. Для экспериментов, зависящих от времени, зрелые нейтрофилы (1 × 10 6 / мл) помещали в 48-луночные планшеты и культивировали в присутствии и в отсутствие 100 мкМ M NA в течение указанного времени.Внутриклеточные уровни цАМФ анализировали с использованием коммерческого набора (Amersham) в соответствии с рекомендациями производителя.

Определение гибели клеток и апоптоза

Гибель клеток оценивали путем поглощения 1 мкМ M бромида этидия и анализа проточной цитометрии (FACS-Calibur). 11, 15, 35, 36 Чтобы определить, является ли гибель клеток апоптозом, измеряли фрагментацию ДНК и перераспределение PS. 11, 15, 35, 36

Иммунопреципитация

Нейтрофилы (5 × 10 6 ) лизировали в буфере, содержащем 0.2% Nonidet P-40, и образцы белка иммунопреципитировали 2 мкг г анти-14-3-3 Ab с последующим осаждением A-сефарозой.

Иммуноблоттинг

Гель-электрофорез и иммуноблоттинг выполняли, как описано ранее. 11, 15, 16, 35, 36 Вкратце, после электропереноса разделенных белков фильтры инкубировали в течение ночи с антителами против каспазы-3, антителами против Mcl-1 или антителами против фосфо-плохих антител (все 1 / 1000) при 4 ° C в TBS / 0,1% Tween 20/5% обезжиренном сухом молоке.Для загрузки контролей очищенные фильтры инкубировали с mAb против GAPDH (1/2000) или против Bad Ab (1/1000). Фильтры промывали, инкубировали с соответствующими вторичными антителами, конъюгированными с HRP (Amersham), и разрабатывали методом ECL (ECL-Kit, Amersham) в соответствии с инструкциями производителя.

Ферментативный анализ каспазы

Ферментативная активность каспазы-3 в бесклеточных экстрактах измерялась как ферментативное превращение колориметрического субстрата Ac-DEVD-pNA при 405 нм в соответствии с инструкциями производителя (набор для анализа клеточной активности QuantiZyme caspase-3 , Биомол).

Статистический анализ

Статистический анализ проводился с использованием критерия Манна – Уитни U . Если представлены средние уровни, в каждом случае указывается стандартное отклонение среднего (S.D.) и количество ( n ) независимых экспериментов. Значение вероятности <0,05 считалось статистически значимым.

Предшественники НАД +, никотиновая кислота и никотинамид защищают клетки от апоптоза, вызванного индуктором множественного стресса, дезоксихолатом

  • 1

    Reddy BS.(1981) Диетический жир и его связь с раком толстой кишки. Cancer Res. 41 : 3700–3705

    CAS PubMed Google ученый

  • 2

    Мартинес Дж. Д., Стратагулз Э.Д., ЛаРю Дж. М., Пауэлл А. А., Гауз П. Р., Крейвен М. Т., Пейн С. М., Пауэлл М. Б., Гернер Е. В. и Эрнест Д. Л.. (1998) Различные желчные кислоты проявляют различные биологические эффекты: дезоксихолевая кислота, промотор опухоли, индуцирует апоптоз, а химиопрофилактика урсодезоксихолевая кислота ингибирует пролиферацию клеток. Nutrition Cancer 31 : 111–118

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 3

    Marchetti MC, Migliorati G, Moraca R, Riccardi C, Nicoletti FR, Mastrandrea V и Morozzi G. (1997) Возможные механизмы, участвующие в апоптозе линий опухолевых клеток толстой кишки, индуцированном дезоксихолевой кислотой, короткоцепочечными жирными кислотами и их смесями. Nutrition Cancer 28 : 74–80

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 4

    Самаха Х., Бернштейн С., Пейн С.М. и Ашер Э.(1995) Оценка гибели клеток в лимфоцитах, трансформированных EBV, с использованием электрофореза в агарозном геле, световой микроскопии и электронной микроскопии. I. Индукция классического апоптоза желчной солью, дезоксихолатом натрия. лейк. Лимфа. 19 : 95–105

    CAS Статья Google ученый

  • 5

    Hague A, Elder DJE, Hicks DJ и Paraskeva C. (1995) Апоптоз в колоректальных опухолевых клетках: индукция с помощью бутирата, пропионата и ацетата короткоцепочечных жирных кислот и дезоксихолата соли желчных кислот. Внутр. J. Cancer 60 : 400–406

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 6

    Payne CM, Bernstein H, Bernstein C и Garewal H. (1995) Роль апоптоза в биологии и патологии: устойчивость к апоптозу в канцерогенезе толстой кишки. Ультраструктура. Патол. 19 : 221–248

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 7

    Кво П., Патель Т., Бронк С.Ф. и Горс Г.Дж.(1995) Активность ядерной сериновой протеазы способствует апоптозу гепатоцитов, индуцированному желчной кислотой. г. J. Physiol. 268 : G613 – G621

    CAS PubMed Google ученый

  • 8

    Патель Т., Бронк С.Ф. и Горс Г.Дж. (1994) Повышение внутриклеточного магния способствует апоптозу, индуцированному гликодеоксихолатом, в гепатоцитах крыс. J. Clin. Инвестировать. 94 : 2183–2192

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 9

    Патель Т и Горс Г.Дж.(1997) Ингибирование апоптоза гепатоцитов, вызванного солями желчных кислот, с помощью антиоксидантного лазароида U83836E. Toxicol. Прил. Pharmacol. 142 : 116–122

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 10

    Патель Т., Арора А. и Горс Г.Дж. (1995) Флуорометрический анализ для количественной оценки разрывов цепей ДНК во время апоптоза. Анал. Biochem. 229 : 229–235

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 11

    Chieco P, Romagnoli E, Aicardi G, Suozzi A, Forti GC и Roda A.(1997) Апоптоз, индуцированный в гепатоцитах крыс in vivo воздействием таурохенодезоксихолата. Histochem. J. 29 : 875–883

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 12

    Greim H, Trulzsch D, Czygan P, Rudick J, Hutterer F, Schaffner F и Popper H. (1972) Механизм холестаза. 6. Желчные кислоты в печени человека с непроходимостью желчных путей или без нее. Гастроэнтерология 63 : 846–850

    CAS PubMed Google ученый

  • 13

    Сетчелл К.Д.Р., Шварц М., О’Коннелл Н.С., Лунд Э.Г., Дэвис Д.Л., Токарный Р., Томпсон Х.Р., Тайсон Р.В., Сокол Р.Дж. и Рассел Д.В.(1998) Выявление новой врожденной ошибки в синтезе желчных кислот: мутация гена оксистерин 7α-гидроксилазы вызывает тяжелое неонатальное заболевание печени. J. Clin. Инвестировать. 102 : 1690–1703

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 14

    Hill MJ. (1986) Желчные кислоты и колоректальный рак у человека. В: Пищевые волокна — основные и клинические аспекты. Вахуни Г.В., Кричевский Д., ред. (Нью-Йорк: Пленум), с.497–513

  • 15

    Коэн Б.И. и Мосбах Э. (1986) Роль желчных кислот при раке толстой кишки. В: Пищевые волокна. Основные и клинические аспекты, Вахоуни Г.В. и Кричевский Д., ред. (Нью-Йорк: Пленум Пресс), стр. 487–496

  • 16

    Шиварам К.Н., Винкльхофер-Руб Б.М., Страка М.С., Деверо М.В., Эверсон Г., Миерау Г.В. и Сокол RJ. (1998) Влияние идебенона, аналога кофермента Q, на токсичность гидрофобных желчных кислот по отношению к изолированным гепатоцитам крысы и митохондриям печени. Free Radical Biol.Med. 25 : 480–492

    CAS Статья Google ученый

  • 17

    Rodrigues CMP, Fan G, Ma X, Kren BT и Steer CJ. (1998) Новая роль урсодезоксихолевой кислоты в ингибировании апоптоза путем модуляции возмущения митохондриальной мембраны. J. Clin. Инвестировать. 101 : 2790–2799

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 18

    Бут Лос-Анджелес, Gilmore IT и Bilton RF.(1997) Повреждение ДНК клеток HT29, вызванное вторичной желчной кислотой: вовлечены ли свободные радикалы? Free Radical Res. 26 : 135–144

    CAS Статья Google ученый

  • 19

    Бомзон А., Холт С. и Мур К. (1997) Желчные кислоты, окислительный стресс и функция почек при обструкции желчных путей. Семин. Нефрол. 17 : 549–562

    CAS PubMed Google ученый

  • 20

    Сокол Р.Дж., Деверо М., Кхандвала Р. и О’Брайен К.(1993) Доказательства участия свободных радикалов кислорода в токсичности желчных кислот для изолированных гепатоцитов крыс. Гепатология 17 : 869–881

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 21

    Sokol RJ, Winklhofer-Roob BM, Devereaux MW и McKim Jr JM. (1995) Образование гидропероксидов в изолированных гепатоцитах крысы и митохондриях печени, подвергшихся воздействию гидрофобных желчных кислот. Гастроэнтерология 109 : 1249–1256

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 22

    Craven PA, Pfanstiel J и DeRubertis FR.(1987) Роль активации протеинкиназы С в стимуляции пролиферации эпителия толстой кишки и образования реактивного кислорода желчными кислотами. J. Clin. Инвестировать. 79 : 532–541

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 23

    Craven PA, Pfanstiel J, Saito R и DeRubertis FR. (1987) Действия сульфасалазина и 5-аминосалициловой кислоты как активных поглотителей кислорода в подавлении индуцированного желчной кислотой увеличения потери эпителиальных клеток толстой кишки и пролиферативной активности. Гастроэнтерология 92 : 1998–2008

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 24

    Craven PA, Pfanstiel J и DeRubertis FR. (1986) Роль реактивного кислорода в стимуляции пролиферации эпителия толстой кишки солями желчных кислот. J. Clin. Инвестировать. 77 : 850–859

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 25

    DeRubertis FR, Craven PA и Saito R.(1984) Стимуляция разрастания эпителия толстой кишки солями желчных кислот. Доказательства участия продуктов липоксигеназы. J. Clin. Инвестировать. 74 : 1614–1624

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 26

    Вентури М., Хэмбли Р.Дж., Глингхаммер Б., Стропила Дж. Дж. И Роуленд И.Р. (1997) Генотоксическая активность в фекальной воде человека и роль желчных кислот: исследование с использованием щелочного анализа комет. Канцерогенез 18 : 2353–2359

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 27

    Пейн С.М., Кроули С., Уошо-Штульц Д., Бриль М., Бернштейн Н., Бернштейн С., Борода С., Голубек Н. и Варнеке Дж. (1998) Белки реакции на стресс поли (АДФ-рибоза) полимераза и NF-κB защищают от апоптоза, индуцированного солями желчных кислот. Cell Death Differ. 5 : 623–636

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 28

    Масамунэ К., Кунитомо К., Сасаки К., Яги К., Коми Н. и Таширо С.(1997) индуцированные желчью разрывы цепи ДНК и биохимический анализ желчных кислот в экспериментальной модели аномального расположения панкреатобилиарных протоков. J. Med. Инвестировать. 44 : 47–51

    CAS PubMed Google ученый

  • 29

    Pool-Zobel BL и Leucht U. (1997) Индукция повреждения ДНК факторами риска рака толстой кишки в клетках толстой кишки человека, полученных из биопсий. Mutation Res. 375 : 105–115

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 30

    Zheng Z-Y, Bernstein H, Bernstein C, Payne CM, Martinez JD и Gerner EW.(1996) Активация желчной кислотой промотора gadd153 и р53-независимого апоптоза: значение для рака толстой кишки. Cell Death Diff. 3 : 407–414

    CAS Google ученый

  • 31

    Чжэн З.-Й и Бернштейн С. (1992) Желчная соль / кислота индукция повреждения ДНК в бактериальных клетках: эффект конъюгации таурина. Nutrition Cancer 18 : 157–164

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 32

    Канделл Р.Л. и Бернштейн С.(1991) Индукция желчной солью / кислотой повреждения ДНК в клетках бактерий и млекопитающих: последствия для рака толстой кишки. Nutrition Cancer 16 : 227–238

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 33

    Ватабе Дж. И Бернштейн Х. (1985) Мутагенность желчных кислот с использованием теста флуктуации. Mutation Res. 158 : 45–51

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 34

    Кулькарни М.С. и Уилдинг К.Л.(1985) Повреждение и восстановление ДНК в эпителиальных (слизистых) клетках и клетках крипт изолированной толстой кишки. Chem.-Biol. Взаимодействовать. 52 : 311–318

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 35

    Кулькарни М.С., Кокс Б.А. и Уилдинг К.Л. (1982) Требования к индукции разрывов цепи ДНК литохолевой кислотой. Cancer Res. 42 : 2792–2795

    CAS PubMed Google ученый

  • 36

    Combettes L, Dumont M, Berthon B, Erlinger S и Claret M.(1988) Высвобождение кальция из эндоплазматического ретикулума желчными кислотами в клетках печени крыс. J. Biol. Chem. 263 : 2299–2302

    CAS PubMed Google ученый

  • 37

    Бернштейн Х., Пейн С.М., Бернштейн С., Шнайдер Дж., Борода С.Е. и Кроули К.Л. (1999) Активация промоторов генов, связанных с повреждением ДНК, окислительным стрессом, стрессом ER и нарушением фолдинга белков солью желчных кислот, дезоксихолатом. Toxicol.Lett. 108 : 37–46

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 38

    Schreck R, Rieber P и Baeuerle PA. (1991) реактивные кислородные промежуточные соединения как очевидно широко используемые посредники в активации фактора транскрипции NF-kappaB и ВИЧ-1. EMBO J. 10 : 2247–2258

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 39

    Wintersberger U и Wintersberger E.(1985) Поли-АДФ-рибозилирование — клеточная аварийная реакция? FEBS Lett. 188 : 189–191

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 40

    Должен S. (1984) АДФ-рибоза в репарации ДНК: новый компонент эксцизионной репарации ДНК. Adv. Рад. Биол. 11 : 1–69

    CAS Статья Google ученый

  • 41

    Luethy JD и Holbrook NJ.(1992) Активация промотора gadd153 генотоксическими агентами: быстрый и специфический ответ на повреждение ДНК. Cancer Res. 52 : 5–10

    CAS PubMed Google ученый

  • 42

    Fink AL. (1999) Шаперон-опосредованное сворачивание белка. Physiol. Ред. 79 : 425–449

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 43

    Nigam SK, Goldberg AL, Ho S, Rohde MF, Bush KT и Sherman MY.(1994) Набор белков эндоплазматического ретикулума, обладающих свойствами молекулярных шаперонов, включает Са 2+ -связывающие белки и члены суперсемейства тиоредоксинов. J. Biol. Chem. 269 : 1744–1749

    CAS PubMed Google ученый

  • 44

    Лю Х., Bowes III RC, ван де Уотер Б., Силленс С., Нагелькерке Дж. Ф. и Стивенс Дж. Л.. (1997) Шапероны эндоплазматического ретикулума GRP78 и кальретикулин предотвращают окислительный стресс, нарушения Ca 2+ и гибель клеток в почечных эпителиальных клетках. J. Biol. Chem. 272 : 21751–21759

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 45

    De Murcia G и de Murcia JM. (1994) Поли (АДФ-рибоза) полимераза: молекулярный ник-сенсор. TIBS 19 : 172–176

    CAS PubMed Google ученый

  • 46

    De Murcia G, Menissier-de Murcia J и Schreiber V. (1991) Поли (АДФ-рибоза) полимераза: молекулярно-биологические аспекты. BioEssays 13 : 455–462

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 47

    Вилькенс К., Шмидт А., Джордж Э., Бредехорст Р. и Хильц Х. (1982) Фрагментация ДНК и истощение НАД. Их связь с оборотом эндогенных моно (АДФ-рибозил) и поли (АДФ-рибозил) белков. J. Biol. Chem. 257 : 12872–12877

    CAS PubMed Google ученый

  • 48

    Грант Р.С. и Капур В.(1998) Глиальные клетки мыши регенерируют НАД после вызванного перекисью истощения, используя в качестве субстратов никотиновую кислоту, никотинамид или хинолиновую кислоту. J. Neurochem. 70 : 1759–1763

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 49

    Weitberg AB. (1989) Влияние добавок никотиновой кислоты in vivo на генетическое повреждение лимфоцитов человека, вызванное радикалами кислорода. Mutat. Res. 216 : 197–201

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 50

    Jackson TM, Rawling JM, Roebuck BD и Kirkland JB.(1995) Большие добавки никотиновой кислоты и никотинамида увеличивают тканевые уровни NAD + и поли (ADP-рибозы), но не влияют на вызванные диэтилнитрозамином измененные очаги печени у крыс Fischer-344. J. Nutr. 125 : 1455–1461

    CAS PubMed Google ученый

  • 51

    Giacosa A и Filiberti R. (1996) Свободные радикалы, окислительное повреждение и дегенеративные заболевания. евро. J. Профилактика рака. 5 : 307–312

    CAS Статья Google ученый

  • 52

    Stohs SJ. (1995) Роль свободных радикалов в отравлении и болезнях. J. Basic Clin. Physiol. Pharmacol. 6 : 205–228

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 53

    Дэвис К.Дж. (1995) Окислительный стресс: парадокс аэробной жизни. Симпозиумы Биохимического общества 61 : 1–31

    CAS Статья Google ученый

  • 54

    Cross CE, Halliwell B, Borish ET, Pryor WA, Ames BN, Saul RL, McCord JM и Harman D.(1987) Кислородные радикалы и болезни человека. Ann. Междунар. Med. 107 : 526–545

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 55

    Петерханс Э. (1997) Окислители и антиоксиданты при вирусных заболеваниях: механизмы болезни и регуляция метаболизма. J. Nutr. 127 : 962S – 965S

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 56

    Schwartz KB.(1996) Окислительный стресс при вирусной инфекции: обзор. Free Radical Biol. Med. 21 : 641–649

    Артикул Google ученый

  • 57

    Pace GW и Leaf CD. (1995) Роль окислительного стресса в заболевании ВИЧ. Free Rad. Биол. Med. 19 : 523–528

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 58

    Boh EE.(1996) Роль активных форм кислорода при дерматологических заболеваниях. Clin. Дерматол. 14 : 343–352

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 59

    Гриндлинг К.К. и Александр Р.В. (1997) Окислительный стресс и сердечно-сосудистые заболевания. Тираж 96 : 3264–3265

    CAS PubMed Google ученый

  • 60

    Джозеф Дж. А., Денисова Н., Фишер Д., Бикфорд П., Прайор Р. и Цао Г.(1998) Возрастная нейродегенерация и окислительный стресс: предполагаемое диетическое вмешательство. Neurol. Clin. 16 : 747–755

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 61

    Warner HR, Hodes RJ и Pocinki K. (1997) Какое отношение имеет смерть клеток к старению? J. Amer. Гериатр. Soc. 45 : 1140–1146

    CAS Статья Google ученый

  • 62

    Катлер RG.(1992) Генетическая стабильность и окислительный стресс: общие механизмы старения и рака. EXS 62 : 31–46

    CAS PubMed Google ученый

  • 63

    Бернштейн С и Бернштейн Х. (1991) Старение, секс и восстановление ДНК Нью-Йорк: Academic Press, Inc., стр. 1–382

  • 64

    Dreher D и Junod AF. (1996) Роль свободных радикалов кислорода в развитии рака. евро. J. Cancer 32A : 30–38

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 65

    Cerutti PA и Trump BF.(1991) Воспаление и окислительный стресс в канцерогенезе. Раковые клетки 3 : 1–7

    CAS PubMed Google ученый

  • 66

    Breimer LH. (1990) Молекулярные механизмы кислородного радикального канцерогенеза и мутагенеза: роль повреждения оснований ДНК. Мол. Канцероген. 3 : 188–197

    CAS Статья Google ученый

  • 67

    Cerutti PA.(1985) Прооксидантные состояния и продвижение опухолей. Наука 227 : 375–381

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 68

    Gensler HL. (1997) Профилактика фотоиммуносупрессии и фотоканцерогенеза с помощью местного никотинамида. Nutrition Cancer 29 : 157–162

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 69

    Редди С., Бибби Нью-Джерси, Ву Д., Суинни К., Барроу Дж. И Эллиотт РБ.(1995) Комбинированная диета без казеина и никотинамида предотвращает диабет у мышей NOD с минимальным инсулитом. Diabetes Res. Clin. Практик. 29 : 83–92

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 70

    Ямада К., Нонака К., Ханафуса Т., Миядзаки А., Тойосима Х и Таруи С. (1982) Профилактические и терапевтические эффекты инъекций никотинамида в больших дозах при диабете, связанном с инсулитом. Наблюдение у мышей с диабетом без ожирения (NOD). Диабет 31 : 749–753

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 71

    Payne CM, Bernstein C и Bernstein H. (1995a) Обзор апоптоза, подчеркивающий роль окислительного стресса, повреждения ДНК и путей передачи сигналов. лейк. Лимфа. 19 : 43–93

    CAS Статья Google ученый

  • 72

    Сирл Дж., Керр Дж. Ф. Р. и Бишоп К. Дж..(1982) Некроз и апоптоз: разные способы гибели клеток с принципиально разным значением. Pathol. Годовой 17 : 229–259

    Google ученый

  • 73

    Уилли А.Х., Керр Дж.Ф.Р. и Карри А.Р. (1980) Смерть клетки: значение апоптоза. Внутр. Rev. Cytol. 68 : 251–306

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 74

    Керр Дж. Ф. Р., Уилли А. Х. и Карри А. Р..(1972) Апоптоз: основное биологическое явление с широким спектром влияния на кинетику тканей. руб. J. Cancer 26 : 239–257

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 75

    Верма И.М., Стивенсон Дж. К., Шварц Е. М., Ван Антверпен Д. и Миямото С. (1995) Rel / NF-kB / IkB family: Интимные рассказы об ассоциации и диссоциации. Genes Dev. 9 : 2723–2735

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 76

    Бопарлан П. и Хискотт Дж.(1996) Биологические и биохимические ингибиторы белков NF-kB / rel и синтеза цитокинов. Cytokine Growth Factor Rev. 7 : 175–190

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 77

    Ян К., Бриль М., Кроули С., Пейн С.М., Бернштейн Х. и Бернштейн С. (1999) Предшественники NAD + , никотиновая кислота и никотинамид, повышают уровень мРНК глицеральдегиддегидрогеназы и глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы в клетках Jurkat. Biochem. Биофиз. Res. Comm. 255 : 133–136

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 78

    Мейер-Зиглер К., Мауро Д. Д., Сил G, Вурцер Дж., Де Риэль Дж. К. и Сировер М. А.. (1991) Ядерная урациловая ДНК-гликозилаза человека представляет собой 37-кДа субъединицу глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы. Proc. Natl. Акад. Sci. США 88 : 8460–8464

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 79

    Sirover MA.(1996) Новые функции гликолитического белка, глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы, в клетках млекопитающих. Life Sci. 58 : 2271–2277

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 80

    Ито Y, Пагано П.Дж., Торнхейм К., Брехер П. и Коэн Р.А. (1996) Окислительный стресс увеличивает уровни мРНК глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы в изолированной аорте кролика. г. J. Physiol. 270 : H81 – H87

    CAS PubMed Google ученый

  • 81

    Sirover MA.(1997) Роль гликолитического белка, глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы, в нормальном функционировании клеток и в клеточной патологии. J. Cell. Biochem. 66 : 133–140

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 82

    Накадзава М., Уэхара Т. и Номура Ю. (1997) Конингиновая кислота (мощный ингибитор глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы) вызывала фрагментацию и конденсацию ДНК в клетках NG108-15. Дж.Neurochem. 68 : 2493–2499

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 83

    Saunders PA, Chen R-W и Chuang D.M. (1999) Ядерная транслокация изоформ глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы во время апоптоза нейронов. J. Neurochem. 72 : 925–932

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 84

    Тодд, доктор медицины, Ли М.Дж., Уильямс Д.Л., Налезный Д.М., Джи Пи, Бенджамин МБ и Фарр С.Б.(1995) Анализ CAT-Tox (L): чувствительная и специфическая мера стресс-индуцированной транскрипции в трансформированных клетках печени человека. Фонд. Прил. Toxicol. 28 : 118–128

    CAS Статья Google ученый

  • 85

    Гриффит О.В. и Мейстер А. (1979) Сильное и специфическое ингибирование синтеза глутатиона бутионин сульфоксимином (S- n -бутилгомоцистеин сульфоксимин). J. Biol. Chem. 254 : 7558–7560

    CAS PubMed Google ученый

  • 86

    Пламмер Дж. Л., Смит Б. Р., Сис Х и Бенд Дж. Р.(1981) Химическое истощение глутатиона in vivo . Methods Enzymol. 77 : 50–59

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 87

    Боггс С.Е., Маккормик Т.С. и Лапетина Е.Г. (1998) Уровни глутатиона определяют апоптоз в макрофагах. Biochem. Биофиз. Res. Comm. 247 : 229–233

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 88

    Purnell MR и Whish WJD.(1980) Новые ингибиторы поли (АДФ-рибоза) синтетазы. Biochem. J. 185 : 775–777

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 89

    Клайдман Л.К., Мукерджи СК, Хатчин Т.П. и Адамс Дж.Д. (1996) Никотинамид как предшественник NAD + предотвращает апоптоз в мозге мышей, индуцированный трет-бутилгидропероксидом. Neurosci. Lett. 206 : 5–8

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 90

    Мукерджи С.К., Клайдман Л.К., Яшарел Р. и Адамс-младший Д.Д.(1997) Повышенный уровень НАД в головном мозге предотвращает апоптоз нейронов in vivo. евро. J. Pharmacol. 330 : 27–34

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 91

    Перо Р.В., Аксельссон Б., Симанн Д., Чаплин Д. и Догерти Г. (1999) Недавно обнаруженные противовоспалительные свойства бензамидов и никотинамидов. Мол. Клетка. Biochem. 193 : 119–125

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 92

    LeDoux SP, Hall CR, Forbes PM, Patton NJ и Wilson GL.(1988) Механизмы защиты никотинамида и тимидина от токсичности аллоксана и стрептозоцина. Диабет 37 : 1015–1019

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 93

    Ди Стефано А, Пиццичини М и Маринелло Э. (1979) Никотинамид и ксантиноксидаза печени. Adv. Exp. Med. Биол. 122B : 189–196

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 94

    Карбовски М., Куроно К., Возняк М., Островски М., Тераниши М., Нисидзава Ю., Усукура Дж., Соджи Т. и Вакабаяси Т.(1999) Образование мегамитохондрий и апоптоз, вызванное свободными радикалами. Free Radical Biol. Med. 26 : 396–409

    CAS Статья Google ученый

  • 95

    Бег А.А. и Балтимор Д. (1996) Существенная роль NF-κB в предотвращении гибели клеток, вызванной TNF-α. Наука 274 : 782–784

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 96

    Baeuerle PA и Baltimore D.(1996) NF-κB: Десять лет спустя. Ячейка 87 : 13–20

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 97

    Беллас Р.Э., Фитцджеральд М.Дж., Фаусто Н. и Соненшейн Г.Е. (1997) Ингибирование активности NF-κB вызывает апоптоз в гепатоцитах мышей. г. J. Pathol. 151 : 891–896

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 98

    Mayo MW, Wang C-Y, Cogswell PC, Rogers-Graham KS, Lowe SW, Der CJ and Baldwin Jr AS.(1997) Необходимость активации NF-κB для подавления p53-независимого апоптоза, индуцированного онкогенными ras. Наука 278 : 1812–1815

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 99

    Schreck R, Meier B, Mannel DN, Droge W. и Baeuerle PA. (1992) Дитиокарбаматы как мощные ингибиторы активации ядерного фактора κB в интактных клетках. J. Exp. Med. 175 : 1181–1194

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 100

    Morgenegg G, Winkler GC, Hubscher U, Heizmann CW, Mous J и Kuenzle CC.(1986) Глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа — негистоновый белок и возможный активатор транскрипции в нейронах. J. Neurochem. 47 : 54–62

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 101

    Saunders PA, Chalecka-Franaszek E и Chuang D.M. (1997) Субклеточное распределение глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы в гранулярных клетках мозжечка, подвергающихся апоптозу, индуцированному цитозинарабинозидом. J. Neurochem. 69 : 1820–1828

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 102

    Сава А., Хан А.А., Хестер Л.Д. и Снайдер Ш. (1997) Глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа: ядерная транслокация участвует в гибели нейронов и ненейрональных клеток. Proc. Natl. Акад. Sci. США 94 : 11669–11674

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 103

    Лю Х., Миллер Э., Ван де Уотер Б. и Стивенс Дж.(1998) Белки стресса эндоплазматического ретикулума блокируют индуцированное окислителем увеличение Ca 2+ и гибель клеток. J. Biol. Chem. 273 : 12858–12862

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 104

    Chatterjee S, Cheng M-F, Berger RB, Berger SJ и Berger NA. (1995) Влияние ингибиторов поли (АДФ-рибозы) полимеразы на индукцию GRP78 и последующее развитие устойчивости к этопозиду. Cancer Res. 55 : 868–873

    CAS PubMed Google ученый

  • 105

    Hothersall JS, Gordge M и Noronha-Dutra AA. (1998) Ингибирование доставки НАДФН 6-аминоникотинамидом: влияние на глутатион, оксид азота и супероксид в клетках J774. FEBS Lett. 434 : 97–100

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 106

    Дитрих Л.С., Фридланд И.М. и Каплан Л.А.(1958) Метаболизм пиридиновых нуклеотидов: механизм действия антагониста ниацина, 6-аминоникотинамида. J. Biol. Chem. 233 : 964–968

    CAS PubMed Google ученый

  • 107

    Адамс Д.Д., Мукерджи С.К., Клайдман Л.К., Чанг М.Л. и Яшарел Р. (1996) Апоптоз и окислительный стресс в стареющем мозге. Ann. N.Y. Acad. Sci. 786 : 135–151

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 108

    Томпсон CB.(1995) Апоптоз в патогенезе и лечении заболеваний. Наука 267 : 1456–1462

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

  • 109

    Брей Т.М. и Тейлор К.Г. (1993) Тканевый глутатион, питание и окислительный стресс. Банка. J. Physiol. Pharmacol. 71 : 746–751

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 110

    Шан Х, Джонс Д.П., Хашми М. и Андерс М.В.(1993) Селективное истощение концентраций митохондриального глутатиона с помощью ( R , S ) -3-гидрокси-4-пентеноата потенцирует окислительную гибель клеток. Chem. Res. Toxicol. 6 : 75–81

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 111

    Mirkovic N, Voehringer DW, Story MD, McConkey DJ, McDonnell TJ и Meyn RE. (1997) Устойчивость к радиационно-индуцированному апоптозу в клетках, экспрессирующих bcl-2, отменяется за счет истощения клеточных тиолов. Онкоген 15 : 1461–1470

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 112

    Холл АГ. (1999) Обзор. Роль глутатиона в регуляции апоптоза. евро. J. Clin. Инвестировать. 29 : 238–245

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 113

    Эллиотт РБ, Пилчер С.К., Фергюссон Д.М. и Стюарт А.В.(1996) Популяционная стратегия профилактики инсулинозависимого диабета с использованием никотинамида. J. Pediatr. Эндокринол. Метаб. 9 : 501–509

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 114

    Петрак Б, Грингард П и Калинский Н. (1996) Об относительной эффективности никотинамида и никотиновой кислоты как предшественников никотинамидадениндинуклеотида. J. Biol. Chem. 241 : 2367–2372

    Google ученый

  • 115

    Payne CM, Glasser L, Tischler ME, Wyckoff D, Cromey D, Fiederlein R и Bohnert O.(1994) Запрограммированная гибель клеток нормальных нейтрофилов человека: модель старения in vitro . Microsc. Res. Tech. 28 : 327–344

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 116

    Пейн К.М., Бьоре-младший К.Г. и Шульц Д.А. (1992) Изменение частоты апоптоза после облучения лимфоцитов человека низкой и высокой дозой рентгеновского излучения. J. Leuk. Биол. 52 : 433–440

    CAS Статья Google ученый

  • 117

    Kaltschmidt C, Kaltschmidt B, Henkel T, Stockinger H и Baeuerle PA.(1995) Селективное распознавание активированной формы фактора транскрипции NF-κB моноклональным антителом. Biol. Chem. Hoppe-Seyler 376 : 9–16

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 118

    Бейкер А., Пейн С.М., Бриль М.М. и Повис Г. (1997) Тиоредоксин, ген, сверхэкспрессируемый при раке человека, ингибирует апоптоз in vitro и in vivo . Cancer Res. 57 : 5162–5167

    CAS PubMed Google ученый

  • 119

    Хокенбери Д.(1995) Определение апоптоза. г. J. Pathol. 146 : 16–19

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 120

    О’Коннор Дж. Э., Кимлер Б. Ф., Морган М. С. и Темпас К. Дж. (1988) Проточный цитометрический анализ внутриклеточных небелковых тиолов с использованием оранжевой ртути. Цитометрия 9 : 529–532

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • Зависимое от активности образование сателлита Гольджи в дендритах изменяет форму поверхностного гликопротеома нейронов

    Рецензент № 1:

    Авторы спросили, как изменение нейрональной активности может привести к изменению гликозилирования белка и каковы функциональные последствия.

    Они показывают, что ремоделирование органелл индуцируется никотиновой стимуляцией как в ненейрональных, так и в нейрональных клетках с фрагментацией аппарата Гольджи. В нейронах фрагментация приводит к образованию сателлитов Гольджи в дендритах, населенных ферментами гликозилирования. В нестимулированных нейронах белки клеточной поверхности продуцируются в эндоплазматическом ретикулуме нейритов и транспортируются на клеточную поверхность с немодифицированными N-гликанами с высоким содержанием маннозы. Напротив, образование сателлитов Гольджи в дендритах приводит к образованию белков, несущих сложные N-гликаны.Эти сложные N-гликаны на никотиновых рецепторах коррелируют с более высокой активностью / ответом на стимуляцию.

    Остается неясным, как везикулы, содержащие ферменты гликозилирования, образуют сателлиты Гольджи там, где их раньше не было. Неясно, является ли основным тормозом образования сателлитов Гольджи в нестимулированных нейронах центростремительный перенос мембран Гольджи или вовлечены другие процессы.

    Мы согласны с тем, что неясно, как формируются точки, содержащие ферменты Гольджи, там, где их раньше не было.В статье мы предполагаем, что точка Гольджи формируется посредством процесса, аналогичного фрагментации Гольджи, вызванной деполимеризацией микротрубочек во время лечения нокодазолом. Там точки Гольджи возникают на периферии клеток в сайтах выхода ER (ERESs) из-за того, что уходящие из ER ферменты Гольджи неспособны перемещаться обратно к Гольджи из-за отсутствия микротрубочек. Наши данные предполагают, что некоторая версия этого процесса происходит во время нейрональной стимуляции, потому что вновь сформированные точки Гольджи (т.е. сателлиты) возникают на ERES и имеют такой же размер, как точки Гольджи, образованные в клетках, обработанных нокодазолом.Точный механизм остается открытым вопросом, и мы сейчас его исследуем.

    Это интересное исследование, которое связывает несколько процессов и предлагает интегрированную модель того, как нейроны созревают в ответ на стимуляцию путем пространственной реорганизации секреторного пути и аппарата гликозилирования. Это, вероятно, положит начало дальнейшей работе в области пластичности нейронов.

    Механистические идеи, приводящие к фрагментации Гольджи, очень ограничены. Авторы используют термин «электрически возбужденные нейроны».Является ли фрагментация результатом притока Ca 2+ или другого процесса? Можно ли получить представление о системе Hek293?

    Предыдущая работа по анализу фрагментации аппарата Гольджи в соме нейронов связала фрагментацию с притоком ca 2+ во время повышенной активности нейронов (Thayer, Jan et al., 2013). Мы упоминаем эту возможность в обсуждении. Дополнительная возможность заключается в том, что образование сателлитов Гольджи возникает из-за потери CAMPSAP2 из Гольджи (что, как известно, происходит во время нейрональной активности (Yau, van Beuningen et al., 2014)). CAMPSAP2 рекрутирует GM130 в Golgi, чтобы обеспечить рост нецентросомных микротрубочек из Golgi (Sanders and Kaverina, 2015; Wu, de Heus et al., 2016). Если эти нецентросомные микротрубочки играют роль в направлении происходящих из ER промежуточных продуктов транспорта к Golgi, то их потеря из Golgi во время нейрональной стимуляции может помочь объяснить накопление ER-уходящих ферментов Golgi на ERESs. В настоящее время мы исследуем эти две возможности с использованием клеток HEK293. Чтобы избежать путаницы в значении «электрически возбужденных нейронов», мы заменили эту фразу на «стимулированные нейроны» по всему тексту.

    Поскольку исследование посвящено формированию форпостов Гольджи и их популяции ферментами гликозилирования, я думаю, было бы важно указать последовательности используемых репортеров. Это важно с точки зрения мембранного трафика, особенно потому, что авторы показывают, что эти форпосты не эквивалентны полному Гольджи (без GM130).

    Например, обычно репортер GAL-T не является полным ферментом, клонированным с флуоресцентным белком.

    Мы согласны и теперь указали последовательности использованных репортеров .

    Также важно: похоже, что это ошибка в природе (или названии) GalNac-T2. Это название обычно относится к полипептиду N-ацетилгалактозамилтрансферазе, одному из ферментов, инициирующих O-гликозилирование муцинового типа. Он не действует на N-гликаны и не является «ферментом позднего действия», как упоминается в тексте. N-ацетил-глюкозаминилтрансферазы действуют на высокое содержание маннозы и обычно называются GNT-I, II и т. Д.

    Приносим извинения за недоразумение.GalNaC-T2, используемый в этом исследовании, представляет собой N-ацетилгалактозаминилтрансферазу-2, которая участвует в O-связанном гликозилировании, как указал автор обзора. Он обнаруживается как в медиальной, так и в транс-областях Гольджи. Мы никогда не намеревались ограничивать использование маркеров Гольджи в этом исследовании ферментами, действующими на N-связанные гликаны. Дополнительные сведения о маркерах ферментов, использованных в этом исследовании, были добавлены в текст, чтобы решить эту проблему.

    Кроме того, авторам следует сослаться на другие работы, изучающие пластичность Гольджи и гликозилирование в ответ на внешние раздражители.Например, PMCID: PMC3964318: скрининг RNAi выявляет большую сигнальную сеть, контролирующую аппарат Гольджи в клетках человека

    Мы благодарим рецензента за то, что он поднял этот вопрос. Мы уже цитировали этот документ в ходе обсуждения.

    Авт. Не обсуждают, как стимуляция цикла — увеличение активности терминального гликозилирования — более высокая активность никотиновых рецепторов может приводить к петле амплификации, стабилизирующей дальнейшие сателлиты Гольджи.

    Это интересный момент.Однако, поскольку у нас нет данных, касающихся этой возможности, мы сочли, что лучше не обсуждать ее.

    И наоборот, обратимы ли спутники Гольджи?

    Да, образование спутников Гольджи под воздействием никотина обратимо и описано на Рисунке 1 — рисунки в приложениях 1 и 2.

    Рецензент № 2:

    В этой рукописи Говинд и его коллеги изучали глико-модификацию мембранных рецепторов после активации нейронов. Они обнаружили, что Гольджи подвергается фрагментации и образует сателлитные структуры в дендритах после активации нейронов, которые действуют как микросекреторная система для регулирования гликозилирования белков.Они сосредоточились на никотиновых рецепторах ацетилхолина и показали, что N-гликаны на этих рецепторах трансформируются из незрелой, высокоманнозной формы в зрелую и сложную форму, содержащую сиаловую кислоту, при активации нейронов. Эксперименты очень хорошо спланированы, а изображения убедительны. Выводы хорошо подтверждаются их данными. Читать эту красивую рукопись одно удовольствие. В целом это важное и новаторское исследование.

    Есть несколько технических проблем, которые авторы должны решить перед публикацией.

    1. Все GalT, St3, Man II и GalNAc-T2 являются ферментами гликозилирования поздней стадии. На рисунке 1C многие спутники Гольджи являются St3-положительными и GalNAc-T2-отрицательными в клетках HEK. Однако на рисунке 2B St3 и GalNAc-T2 полностью совместно локализованы в дендритах нейронов. Авторы должны объяснить это несоответствие? Это связано с разными типами клеток или разными механизмами? Авторы должны обсудить возможности. Другие ферменты, такие как ManII, также локализуются совместно с St3 в клетках HEK?

    Мы согласны с тем, что сателлиты Гольджи, образующиеся из ER в дендритах, более однородны по своему составу ферментов Гольджи, чем гетерогенные фрагменты Гольджи, наблюдаемые в обработанных никотином клетках HEK293., Мы полагаем, что есть два возможных объяснения этого несоответствия: (1) ранее существовавшие стеки Гольджи в теле клетки стимулированных нейронов подвергаются дифференциальному делению с образованием спутников Гольджи (Quassollo, Wojnacki et al., 2015) или (2) дифференциальным скорость цикла ферментов Гольджи обратно в ER и проникновение в ERES-локализованные сателлиты Гольджи, как это происходит во время лечения нокодазолом (Cole, Ellenberg et al., 1998, Miles, McManus et al., 2001), генерирует гетерогенные популяции ферментов в Спутники Гольджи.Хотя мы не показываем распределение Man II в клетках HEK 293, мы демонстрируем в нейронах, что точки / сателлиты Гольджи положительны для Man II, GalNac и St3.

    2. Вывод о том, что комплексное гликозилирование увеличивает функциональность рецептора a4b2R, следует интерпретировать с осторожностью, как показано на рисунке 7F. Однако на Фигуре 6B уровень общего белка a4b2R, по-видимому, снижается после лечения сваинсонином. Авторы не представили никаких доказательств, чтобы исключить, что уменьшение количества белка a4b2R вызывает более низкую амплитуду тока на рисунке 7F.Я предлагаю авторам обсудить это предостережение. Альтернативно, возможно ли подавить некоторые ферменты гликозилирования, не влияя на уровни белка a4b2R, а затем проверить, не нарушена ли функциональность рецептора a4b2R? Однако этот эксперимент не является обязательным для публикации. Если у авторов есть эти данные, их неплохо включить.

    Чтобы исключить возможность того, что изменения поверхностных уровней α4β2R во время лечения сваинсонином лежат в основе эффекта сваинсонина по блокированию повышенного токового ответа α4β2R при обработке никотином, мы провели два дополнительных эксперимента, включающих биотинилирование α4β2R на поверхности клетки в этих условиях.Во-первых, мы повторили эксперимент, показанный на фиг. 6B, еще два раза и выполнили денситометрию на полосах поверхностных биотинилированных субъединиц α4. Средняя интенсивность субъединиц α4 после обработки сваинсонином существенно не отличалась от необработанных контролей (см. Рисунок 7, приложение 2), что указывает на то, что количество поверхностных α4β2R не снижается обработкой сваинсонином. Во втором эксперименте мы использовали связывание 125 I-эпибатидина для измерения количества поверхностных биотинилированных поверхностных α4β2R, что является более количественным анализом.И снова не было значительного различия в связывании 125 I-эпибатидина между необработанными и обработанными сваинсонином образцами после обработки никотином. Эти новые эксперименты теперь добавлены к дополнительным материалам (рис. 7 — дополнение к рисунку 2). Из этих результатов мы заключаем, что снижение функциональности рецептора α4β2R в клетках, обработанных сваинсонином плюс никотин, не связано со снижением уровней α4β2R на поверхности клетки. Следовательно, способность никотина увеличивать функциональность α4β2R, вероятно, связана с влиянием препарата на процессинг гликопротеина рецептора.

    3. На рисунке 5D-E, St3-GFP, по-видимому, не локализуется совместно с α4β2R-HA после лечения никотином. Репрезентативны ли изображения? Более того, интересно показать, локализуются ли при лечении нокодазолом St3-GFP и α4β2R-HA совместно, как показано в случае лечения никотином (рис. 7A-B). Также интересно проверить, подвергается ли α4β2R гликомодификации после лечения нокодазолом. Эти эксперименты позволят полностью изучить сходство и различие между лечением никотином и лечением нокодазолом.Если у авторов уже есть эти данные, их неплохо включить. В противном случае авторы могут опубликовать их в другом будущем исследовании.

    На фиг. 5D-E St3-GFP не локализуется совместно с α4β2R-HA, потому что мечение антител против HA Ab было выполнено таким образом, что были помечены только α4β2R на поверхности клетки, а не внутриклеточные пулы. В этом эксперименте мечение антител против НА использовалось только для того, чтобы показать, что нейроны были трансфицированы и экспрессировали α4β2R. Мы переписали текст, чтобы прояснить этот момент.

    Интересен вопрос о том, вызывает ли лечение нокодазолом изменения α4β2R, аналогичные тем, которые получают при лечении никотином, и мы начали заниматься этим. Обработка только нокодазолом не изменяет гликозилирование α4β2R и не увеличивает связывание I-эпибатидина 125 , как при лечении никотином. Мы еще не исследовали текущие изменения, вызванные лигандом. Однако лечение нокодазолом и никотином вместе вызывает усиление связывания I-эпибатидина 125 значительно больше, чем при использовании одного никотина, что позволяет предположить, что лечение нокодазолом усиливает эффекты никотина.Поскольку для понимания этого требуется дальнейшая работа, мы не включаем это в документ.

    4. На фиг. 7D-E биохимические данные показывают, что поверхностные рецепторы подвергаются эндосомной рециркуляции и гликоперемоделированию в течение 5 часов после обработки никотином. Может ли автор также показать, что в культивируемых клетках или нейронах HEK EEA1 колокализуется с α4β2R-HA уже через 5 часов после обработки никотином?

    Мы провели этот эксперимент на нейронах и действительно обнаружили, что α4β2R-HA колокализуется с эндосомами, меченными EEA1.Важно отметить, что большая часть перекрытия имеет небольшое смещение, подобное тому, что мы наблюдали на рисунке 8E в рукописи. Эти данные согласуются с тем, что α4β2R-HA подвергается эндоцитозу, перемещается к эндосомам, а затем к сателлитам Гольджи. Мы добавили эти новые данные в документ на Рисунке 7 — дополнение к рисунку 1.

    5. Сообщалось, что форпосты гольджи редко распространяются в аксонах сенсорных нейронов мух. Локализуются ли спутники Гольджи в аксонах?

    У нас действительно есть доказательства того, что спутники Гольджи локализуются в аксонах.Однако мы не включили эти данные в это исследование, так как планируем опубликовать их в будущем исследовании.

    Рецензент № 3:

    […]

    1. Возможные артефакты сверхэкспрессии. Большая путаница в этой области возникла из-за использования сверхэкспрессированных белков мембранных грузов или маркеров органелл. Как видно на примере эндогенных белков Гольджи, включая GM130, GRASP55 / 65, гигантин… и маркеров, меченных GFP, таких как GalT-GFP или ManII-GFP (после умеренной экспрессии), мембран Гольджи (т.е.e форпосты Гольджи или GO) редко встречаются в дендритах (см. Обзоры). В соответствии с этим, обширная трехмерная ЭМ реконструкция дендритов в гиппокампе и кортикальных пирамидных нейронах (например, Wu et al., 2017, doi: 10.1073 / pnas.1701078114, Cui-Wang et al., Doi: 10.1016 / j.cell.2011.11) .056) показали высокое содержание дендритных ER, ERGIC и эндосом, но очень редкое появление в дендритах многослойных мембран, характерных для истинных элементов Гольджи. Как показано, например, Horton и Ehlers с GalT-GFP, совместная экспрессия мембранного груза, включая VSVG, значительно увеличивает количество GO в дендритах.Сравнимым образом данные, показанные здесь на фиг. 2C ii в сравнении с данными 3B-C, также указывают на то, что увеличение секреторной нагрузки в секреторном пути индуцирует образование / рекрутирование элементов, содержащих ManII-GFP, в дендритах. Эту проблему можно решить, выполнив дополнительные контрольные эксперименты.

    Мы решили эту проблему путем умеренной экспрессии ManII-GFP, GalNac-T2-mCherry и ST3-Halo парами или одиночного окрашивания интернализованным флуоресцентно меченным WGA или антителом St3 в дендритах (рисунок 4 — приложение к рисунку 1).Во всех случаях перекрытие между разными маркерами находится в диапазоне 70-80%. Единственным исключением является перекрытие между ManII-GFP и антителом St3, где перекрытие составляет ~ 50%. Более низкое перекрытие согласуется с нашим выводом о том, что экспрессированный, меченый St3 маркирует только 50% количества эндогенных сателлитов Гольджи, окрашенных тем же антителом St3 (рис. 2D и E в рукописи). В качестве дополнительного теста на то, влияет ли совместная экспрессия субъединиц никотинового рецептора с экспрессируемым меченным St3 на результаты, мы исследовали, как обработка бикукулином изменяет количество сателлитов Гольджи, измеренных с использованием антитела St3.Как показано на фиг. 2 — рисунок в приложении 2, обработка бикукулином привела к такому же увеличению количества точек, окрашенных антителом St3, как и во время лечения никотином, где для наблюдения увеличения требуется коэкспрессия α4β2R. Эти результаты свидетельствуют о том, что в наших результатах есть артефакты сверхэкспрессии.

    2. Являются ли сателлиты Гольджи на самом деле эндосомными компартментами Гольджи или нейронами? Характер распределения эндогенного St3, показанный на рисунке 2D, разительно отличается от такового для других средних / поздних маркеров Гольджи, используемых в исследовании.В частности, кажется, что структуры, содержащие St3 (то есть эндогенный белок), гораздо более распространены в дендритах, чем цис / поздние мембраны Гольджи, меченные GalT, ManII и GalNacT2. Так ли это? Если да, то как авторы могут исключить, что в нейронах St3 связан как с мембранами позднего Гольджи, так и с мембранами не-Гольджи, такими как TGN / эндосомные структуры или другие эндомембранные системы, в зависимости от активности нейронов? Действительно, количество и морфология структур, содержащих St3, в дендритах больше напоминает эндосомный путь и чем-то напоминает pGolT (Михайлова и др., 2016), синтетический мембранный белок, содержащий как TGN / эндосомные мотивы, так и мотивы нацеливания Гольджи. Перефразируя некоторые утверждения и проводя дополнительные эксперименты, можно было бы решить эту проблему.

    Предлагаемые эксперименты были выполнены путем измерения перекрытия между пунктами, меченными эндогенным и экспрессируемым меченным ST3, и пунктами, меченными эндосомными маркерами EEA1, VPS35 или интернализованным рецептором трансферрина (рис. 4 — приложение к рисунку 2). Перекрытие находилось в диапазоне ~ 25% для точек, меченных эндогенным и экспрессируемым меченным ST3, и точек, меченных ManII-GFP, GalNac-T2-mCherry или флуоресцентно меченых WGA.Эти результаты подтверждают идею о том, что спутники Гольджи — это органеллы, отличные от эндосом.

    3. Функциональная значимость данных в ячейках HEK. Анализы дегликозилирования, показанные на рис. 6 и 7, убедительны, но, хотя я, возможно, что-то упустил, были выполнены только на клетках HEK. Таким образом, представление о том, что активность нейронов изменяет гликопротеом на поверхности нейронов, основано в первую очередь на повышенных уровнях поверхностных и интернализованных белков, связывающих WGA, в нейронах после обработки никотином или бикукуллином.Таким образом, название статьи вводит в заблуждение. Эксперименты по поверхностной экспрессии, гликозилированию и функции эндогенных никотиновых рецепторов в нейронах значительно увеличат эффективность исследования.

    Мы понимаем эту озабоченность и теперь обсуждаем в отредактированном тексте, почему мы не можем измерить поверхностную экспрессию и статус гликозилирования эндогенных никотиновых рецепторов в нейронах. В отличие от никотиновых рецепторов на нервно-мышечных соединениях на периферии или рецепторов глутамата и ГАМК головного мозга, никотиновые рецепторы головного мозга (такие как α4β2R, используемые в нашем исследовании) не обнаруживаются сгруппированными в постсинаптических участках ни в одном из известных синапсов.Эти рецепторы также неоднородны по структуре, их субъединицы часто собираются вместе с субъединицами, отличными от субъединиц α4 и β2. Их реакции, вызванные лигандами, в лучшем случае примерно в 10-50 раз меньше, чем реакции, вызванные глутаматом или рецептором GABA A в возбуждающих и тормозных синапсах мозга. Более того, α4β2R являются лишь одним из нескольких подтипов никотиновых рецепторов, обнаруженных в головном мозге, и лишь небольшой процент нейронов in vivo и in vitro экспрессируют никотиновые рецепторы. Действительно, в культурах нейронов, использованных в нашем исследовании, мы обнаружили, что только 5-10% нейронов имели эндогенно экспрессируемые α4β2R (Govind, Walsh et al., 2012). Как обсуждается ниже, различия в возбудимости нейронов увеличивают вариабельность текущего ответа. Неудивительно, что нет опубликованных отчетов об измерении уровней эндогенной экспрессии α4β2R или текущих ответов в культурах нейронов, а те немногие, которые выполнены на срезах мозга, имеют тенденцию быть противоречивыми (например, Nashmi, Xiao et al., 2007, Baker, Mao et al. ., 2013). Уровни α4β2R кажутся слишком маленькими, сильно изменчивыми и / или в процессах, далеких от сомы, где токи могут быть проанализированы.

    Помимо трудностей при анализе экспрессии и функциональности эндогенного α4β2R в нейронах, не существует доступных антител, распознающих поверхностные антигены, специфичные для α4β2R. Таким образом, для количественной оценки свойств α4β2R мы экспрессировали субъединицы β2, помеченные HA, в их внеклеточном домене. Используя HA-специфические антитела, мы показали, что воздействие никотина изменяет поверхностную экспрессию трансфицированных α4β2R в нейронах (рисунки 5D, E). Это также привело к эндоцитозу α4β2R и доставке в сателлиты Гольджи (рис. 8G).В экспериментах, проведенных на нейронах, мы обнаружили значительное увеличение поверхностного связывания WGA, нацеленного на сиаловую кислоту, после стимуляции нейронов бикукулином (рис. 8С). WGA вместе с трансфицированными α4β2R также подвергались эндоцитозу и передавались в те же спутники Гольджи в дендритах никотин-стимулированных нейронов (рис. 8G). Это указывает на то, что многие эндогенные поверхностные гликопротеины (не только α4β2R) претерпевают изменения в сиалировании с изменениями активности нейронов. Эти результаты дополняют выводы Boll et al., (2020), которые идентифицировали более сотни синаптических белков в синаптосомах, содержание сиаловой кислоты в которых было изменено после нейрональной стимуляции. Особый интерес представляют ионотропные рецепторы глутамата. Как установлено Hanus et al., (2016), гликаны на рецепторах, содержащих GluK2 и NR2A на клеточной поверхности, являются, по крайней мере, частично незрелыми гликанами с высоким содержанием маннозы. В Boll et al. (2020) было обнаружено, что сиаловая кислота быстро добавляется к этим двум рецепторам в синаптосомах. В других исследованиях было обнаружено, что GluK2-содержащие каинатные рецепторы в нейронах могут передаваться через спутники Гольджи (Evans, Gurung et al., 2017) и что они претерпевают функциональные изменения, вызванные изменениями их гликозилирования (Vernon, Copits et al., 2017). Наконец, различные другие переносчики ионных каналов, рецепторы и молекулы поверхностной адгезии, как было показано, подвергаются динамической регуляции своего сиалирования в нейронах (Scott and Panin 2014). Эти находки предполагают, что подобно α4β2Rs, многие поверхностные гликопротеины становятся сиалированными во время нейрональной стимуляции, которая может быть результатом образования сателлитов Гольджи. Мы добавили эту новую информацию в текст, чтобы помочь читателям оценить функциональную значимость наших результатов.

    Мы считаем, что единственный надежный способ измерения повышения функциональной активности α4β2R под действием никотина — это использование гетерологичной экспрессии субъединиц α4 и β2 в культивируемых клетках, таких как клетки HEK293. Этот подход гарантирует, что только никотиновые рецепторы, содержащие известный набор субъединиц (т.е. субъединицы α4 и β2), исследуются на отсутствие других подтипов никотиновых рецепторов с относительно небольшими межклеточными вариациями и с известной концентрацией никотина во время позитивной регуляции. Проблема межклеточной изменчивости важна, потому что один и тот же нейрон нельзя зарегистрировать с помощью электрофизиологии в течение времени, необходимого для воздействия никотина.Другое преимущество гетерологичной экспрессии в системе HEK293 состоит в том, что клетки не возбудимы, за исключением добавления никотина или других агонистов α4β2R. Эта особенность важна, потому что количество спутников Гольджи, через которые, вероятно, проходит α4β2R, чтобы стать функционально активированным, может быть увеличено другими формами возбудимости, кроме никотина, в нейронах, но не в клетках HEK293.

    Мы рассмотрели возможность специфического блокирования добавления сиаловой кислоты путем подавления сиалил-трансфераз в качестве еще одного теста на функциональную значимость сиалирования в нашей системе.Проблема с нокдауном сиалилтрансферазы, однако, заключается в том, что существует по крайней мере четыре потенциальных гена сиалилтрансферазы, которые необходимо будет нокаутировать, чтобы предотвратить добавление сиаловой кислоты в клетки. Поскольку этого никогда раньше не делали, возникает еще один вопрос, не вызовет ли это нецелевых эффектов от других ролей, которые играет сиаловая кислота. По этим причинам мы полагались на проверенный и надежный метод лечения сваинсонином, чтобы изучить эффект блокирования сиалирования в нашей системе.

    Хотя мы не смогли проанализировать эндогенные α4β2R в нейронах для проверки того, как функциональная активация коррелирует с изменениями в процессинге гликанов, мы провели эксперименты, в которых изучали, как воздействие никотина влияет на поверхностную экспрессию трансфицированных α4β2R в нейронах (рисунки 5D, E) и как воздействие никотина влияет на Эндоцитоз α4β2R и доставка в сателлиты Гольджи (рис. 8G).Чтобы продемонстрировать, что функциональная активация коррелирует с изменениями в процессинге гликанового комплекса α4β2R, а не с изменениями уровней α4β2R на поверхности в клетках HEK293, мы предоставляем новые данные, демонстрирующие, что количество α4β2R на поверхности клетки не изменяется при лечении сваенсонином (см. Рис. приложение 2).

    В том же духе, включая функциональные данные, непосредственно касающиеся того, влияют ли сообщаемые изменения гликозилирования на возбудимость нейронов в этом контексте, также могут усилить влияние результатов.

    Мы показали, что ингибирование сиалирования с помощью обработки сваинсонином снижает индуцированные никотином мембранные токи в клетках HEK293, экспрессирующих α4β2R. Другие исследования, в том числе Boll et al., (2020), продемонстрировали, что изменения содержания гликановой сиаловой кислоты влияют на возбудимость нейронов (Boll, Jensen et al., 2020). Одно конкретное исследование показало, что применение нейраминидазы (которая отщепляет сиаловую кислоту от поверхностных гликанов) изменяет стационарную активацию и инактивацию потенциалзависимых натриевых каналов в нейронах (Isavev et al., 2007), при этом изменения в функции натриевых каналов снижают возбудимость нейронов и повышают судорожный порог гиппокампа, тем самым уменьшая судороги. Другое исследование, проведенное Minami et al. (2016), показало, что ингибитор нейраминидазы снижает LTP в синапсах CA3 гиппокампа, предполагая, что добавление сиаловой кислоты необходимо для LTP (Minami, Saito et al., 2016). Та же группа обнаружила, что изменения активности нейраминидазы in vivo коррелируют с предыдущими данными о LTP (Minami, Meguro et al., 2017). В другом исследовании та же группа обнаружила, что изменения содержания сиаловой кислоты регулируют высвобождение глутамата нейронами гиппокампа посредством модуляции передачи сигналов ca 2+ (Minami, Ishii et al., 2018). В совокупности эти данные согласуются с изменениями содержания сиаловой кислоты в гликопротеинах мембран нейронов и в синапсах, оказывающих значительное влияние на возбудимость нейронов и синаптическую передачу. Мы добавили эти ссылки к нашему обсуждению, чтобы поддержать наше предположение о том, что изменения в гликозилировании поверхностных рецепторов через образование сателлитов Гольджи влияют на возбудимость нейронов.

    Список литературы

    Бейкер, Л. К., Д. Мао, Х. Чи, А. П. Говинд, Ю. Ф.Вальехо, М. Яковьелло, С. Эррера, Дж. Дж. Кортрайт, В. Н. Грин, Д. С. МакГихи и П. Везина (2013). «Прерывистое воздействие никотина активирует nAChR в дофаминовых нейронах VTA и повышает чувствительность опорно-двигательного аппарата, реагирующего на препарат». Eur J Neurosci 37 (6): 1004-1011.

    Болл И., П. Йенсен, В. Шваммле и М. Р. Ларсен (2020). «Зависимая от деполяризации индукция сайт-специфических изменений сиалирования на N-связанных гликопротеинах в нервных окончаниях крыс». Mol Cell Proteomics 19 (9): 1418-1435.

    Коул, Н.Б., Дж. Элленберг, Дж. Сонг, Д. ДиЭулиис и Дж. Липпинкотт-Шварц (1998). «Ретроградный транспорт белков, локализованных по Гольджи, в ER». J Cell Biol 140 (1): 1-15.

    Эванс, А. Дж., С. Гурунг, К. А. Уилкинсон, Д. Дж. Стивенс и Дж. М. Хенли (2017). «Сборка, передача секреторных путей и поверхностная доставка каинатных рецепторов регулируются нейронной активностью». Cell Rep 19 (12): 2613-2626.

    Говинд, А. П., Х. Уолш и В. Н. Грин (2012). «Никотин-индуцированная активация нативных нейрональных никотиновых рецепторов вызывается множеством механизмов.»J Neurosci 32 (6): 2227-2238.

    Майлз, С., Х. Макманус, К. Э. Форстен и Б. Сторри (2001). «Доказательства того, что весь аппарат Гольджи циклически проходит через интерфазные клетки HeLa: чувствительность белков матрикса Гольджи к блоку выхода ER». J Cell Biol 155 (4): 543-555.

    Минами, А., А. Исии, С. Шимба, Т. Кано, Э. Фудзиока, С. Сай, Н. Осио, С. Исибаши, Т. Такахаши, Ю. Куребаяси, Х. Канадзава, Н. Юки, Т. Оцубо, К. Икеда и Т. Сузуки (2018). «Снижение регуляции высвобождения глутамата из нейронов гиппокампа сиалидазой.»J Biochem 163 (4): 273-280.

    Минами, А., Ю. Мегуро, С. Исибаши, А. Исии, М. Ширатори, С. Сай, Ю. Хори, Х. Симидзу, Х. Фукумото, С. Шимба, Р. Тагучи, Т. Такахаши, Т. Оцубо, К. Икеда и Т. Сузуки (2017). «Быстрая регуляция активности сиалидазы в ответ на нервную активность и удаление сиаловой кислоты во время обработки памяти в гиппокампе крысы». J Biol Chem 292 (14): 5645-5654.

    Минами, А., М. Сайто, С. Мамада, Д. Иено, Т. Хикита, Т. Такахаши, Т. Оцубо, К. Икеда и Т.Судзуки (2016). «Роль сиалидазы в долгосрочном потенциале на синапсах Mossy Fiber-CA3 и пространственной памяти, зависящей от гиппокампа». PLoS One 11 (10): e0165257.

    Р. Нашми, К. Сяо, П. Дешпанде, С. МакКинни, С. Р. Грэди, П. Уайтакер, К. Хуанг, Т. МакКлюр-Бегли, Дж. М. Линдстром, К. Лабарка, А. С. Коллинз, М. Дж. Маркс и Х. А. Лестер (2007). «Хронические никотиновые клетки специфически активизируют функциональные никотиновые рецепторы альфа 4 *: основу как толерантности в среднем мозге, так и усиленной долгосрочной потенциации перфорантного пути.»J Neurosci 27 (31): 8202-8218.

    Квасолло, Г., Дж. Войнацки, Д. А. Салас, Л. Гастальди, М. П. Марзоло, К. Конде, М. Бисбаль, А. Куве и А. Касерес (2015). «Сигнальный путь RhoA регулирует формирование дендритных форпостов Гольджи». Curr Biol 25 (8): 971-982.

    Сандерс, А.А. и И. Каверина (2015). «Зарождение и динамика микротрубочек, полученных из Гольджи». Front Neurosci 9: 431.

    Скотт, Х. и В. М. Панины (2014). «Роль N-гликозилирования белков в нервной передаче.»Гликобиология 24 (5): 407-417.

    Тайер, Д. А., Ю. Н. Ян, Л. И. Ян (2013). «Повышенная активность нейронов фрагментирует комплекс Гольджи». Proc Natl Acad Sci U S A 110 (4): 1482-1487.

    Вернон, К. Г., Б. А. Копиц, Дж. Р. Штольц, Ю. Ф. Гусман и Г. Т. Суонсон (2017). «Содержание N-гликана модулирует функциональные свойства каинатного рецептора». J. Physiol 595 (17): 5913-5930.

    Ву, Дж., К. де Хеус, К. Лю, Б. П. Буше, И. Нордстра, К. Цзян, С. Хуа, М. Мартин, К. Ян, И. Григорьев, Э.А. Катруха, А. Ф. М. Алтелаар, К. К. Хугенрад, Р. З. Ци, Дж. Клумперман и А. Ахманова (2016). «Молекулярный путь организации микротрубочек в аппарате Гольджи». Dev Cell 39 (1): 44-60.

    Яу, К.В., С.Ф. ван Бёнинген, И. Кунья-Феррейра, Б. М. Клоин, Э. Ю. ван Баттум, Л. Уилл, П. Шатцле, Р. П. Тас, Дж. Ван Кругтен, Е. А. Катруха, К. Цзян, П. С. Вульф, М. Михайлова, М. Хартеринк, Р. Дж. Пастеркамп, А. Ахманова, Л. К. Капитеин и К. С. Хугенрад (2014). «Связывающий минус-конец белок микротрубочек CAMSAP2 контролирует спецификацию аксонов и развитие дендритов.»Нейрон 82 (5): 1058-1073.

    https://doi.org/10.7554/eLife.68910.sa2 .

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

    2008 - 2021 | Охотники за сердцами

    Коммерческий продукт Berocca plus Габбровитал B Bioc379
    Аналит мг / таблетка мг / 100 мл мг / 100 мл мг / флакон
    Найдено Заявлено Найдено Заявлено Найдено Найдено Найдено Заявлено

    B 1 1.54 15,00 1,00
    B 1a
    B 2 1,76
    B 2a 28.30
    B 3 18,00 3,00 10,00
    B 5 B 5
    B 6 2,20 1,50 20,00 15375 00
    B 9 0,25