Электрофорез это: суть метода и какие вещества вводятся в организм в клинике МЕДСИ в Санкт-Петербурге

Содержание

Электрофорез

Цветной бульвар

Москва, Самотечная, 5

круглосуточно

Преображенская площадь

Москва, Б. Черкизовская, 5

Ежедневно

c 09:00 до 21:00

Выходной:

1 января 2020

Бульвар Дмитрия Донского

Москва, Грина, 28 корпус 1

Ежедневно

c 09:00 до 21:00

Мичуринский проспект

Москва, Большая Очаковская, 3

Ежедневно

c 09:00 до 21:00

Электрофорез в современном диагностическом процессе

Электрофорез в современном диагностическом процессе

Профессор Н. А. Сергеева.

Кафедра факультетской хирургии Российский государственный медицинский Университет, г. Москва

Современная диагностика в любой области медицины основана на высоком уровне технического обеспечения исследований, включаемых в сложный цикл клинического обследования.

В настоящее время к клиническим лабораториям все настойчивее предъявляются требования проведения наиболее информативных и экономичных исследований. Аналитические методы, основанные на предложенном Тиселиусом в 1937 году (11) принципе электрофореза представляют все увеличивающуюся область диагностических исследований, проводимых в клинических лабораториях. Однако, из-за недостаточной осведомленности врачей о современных возможностях данного метода его значимость в диагностическом процессе еще не полностью оценена.
Тиселиус за разработку метода электрофоретического разделения макромолекул был удостоен Нобелевской премии в 1948 году. Принципиальной основой всех электрофоретических методов является тот факт, что находящиеся в растворе молекулы, располагающие электрическим зарядом, под действием сил электрического поля смещаются в сторону противоположно заряженного электрода.

Скорость миграции вещества в среде с одной и той же силой электрического поля, зависит от размера частиц и их электрического заряда. В случае белковых молекул, благодаря их амфотерным свойствам, направление и скорость смещения во многом зависит от рН среды, в которой происходит миграция (3). Заряд различных белков в растворах с одинаковым рН зависит от аминокислотного состава, так как диссоциация белковых цепей приводит к образованию групп, имеющих положительный или отрицательный заряд. Под влиянием сил электрического поля компоненты разгоняемой системы распределяются согласно их заряду, приобретая соответствующую скорость движения, т.е. происходит электрофоретическое разделение. Внедрение электрофоретических «носителей» привело к улучшению технологий и одновременно к упрощению фракционирования. В качестве «носителей» используются фильтровальная бумага, целлюлоза, ацетат целлюлозы, различные гели (полиакриламид), агароза и др. При этом во время элекрофореза, наряду с разделением частиц согласно их зарядам, вступает в силу так называемый «молекулярно ситовой эффект», когда гелевая структура ведет себя по отношению к ионам как фильтр.
Ионы, превышающие ее пористость не проходят или проходят очень медленно, а более мелкие ионы быстрее проникают через поры медиума. Таким образом, скорость передвижения зависит не только от заряда иона, но и от величины пор геля, формы пор, величины движущихся ионов, взаимодействия между матрицей геля и движущимися ионами (адсорбция и др.)

Электрофорез как биохимический метод — очень мощное приспособление для оценки широкого спектра жизненных процессов.

Наибольшая популярность до настоящего времени принадлежит электрофорезу белков как одному из наиболее информативных лабораторных тестов, используемых в настоящее время (4). Он предполагает огромную диагностическую информацию, особенно когда исследование дополняется такими высокоспецифичными тестами как иммуноэлектрофорез, количественной оценкой иммуноглобулинов и других специфических протеинов, Т- и В-лимфоцитов и стадий трансформации лимфобластов.
Электрофоретическое разделение протеинов позволяет изучать их биологические и физические характеристики, являясь индикатором заболеваний печени и почек, иммунной системы, злокачественной патологии, острых и хронических инфекций, генетических поломок, заболеваний центральной нервной системы и многих других видов патологии.
Используя ацетат целлюлозу, можно разделить сывороточные белки на 5 фракций: альбумин и 4 глобулиновых группы
— альфа 1, альфа 2, бета (часто подразделяются на 2 различные группы
— бета 1 и бета 2) и гамма (7) (рис.1).

Рис.1 Нормальная электрофореграмма сывороточных протеинов

Альбумин — низкомолекулярный сывороточный белок (м.в. около 70000 дальтон), образующий комплексы с многими протеинами, гормонами, билиарными пигментами, кальцием и другими субстанциями, играет ключевую роль в поддержании осмотического давления.

Все 4 группы глобулинов характеризуются гораздо более высоким молекулярным весом, чем альбумин. Альфа- и бета-глобулины также являются транспортными формами протеинов, образуя комплексы с пигментами, металлами, углеводами и липидами. Эти белки очень гетерогенны, разброс их молекулярного веса от 40000 до 1000000 дальтон. Гамма глобулины, или иммуноноглобулины характеризуются молекулярным весом от 15000 дальтон до более чем 1000000 дальтон (для IgM).
Синтезируемые В-лимфоцитами антитела в виде JgG, JgA и JgE представляют собой один из компонентов иммунной защиты организма, которая включает кроме того Т-клеточный иммунитет, фагоцитоз и систему комплемента. Нарушение одного из компонентов иммунной системы приводит к изменению защиты организма и клинически выявляется как одна из форм иммунодефицитного состояния. Выявления и идентификация нозологических форм иммунодефицитных состояний — актуальнейшая проблема клинической медицины. Одним их наиболее информативных методов первичной диагностики иммунодефицитов является электрофоретическая протеинограмма сыворотки крови.

В последние годы все большую диагностическую значимость приобретает электрофорез высокого разрешения протеинов, который позволяет выделить около 15 фракций белков. Число фракций зависит от среды, на которой происходит разгонка, и техники окрашивания. Наряду с числом компонентов, их качественной и количественной характеристикой иногда возникает необходимость дальнейшего более подробного исследования.

В 1976 году для изучения иммуноглобулинов был предложен метод иммунофиксации (11). Электрофорез с иммунофиксацией (JFE) — это двухступенчатый процесс, использующий электрофорез протеинов на первом этапе и иммунопреципитацию на втором. При этом исследованию может быть подвергнута сыворотка крови, моча, спинномозговая или другая жидкость организма. На электрофоретически разделенные антигены наносят иммунные сыворотки, содержащие различные специфические антитела. При встрече соответствующих антигена и антитела в зоне оптимального их соотношения наблюдается реакция преципитации невооруженным глазом. Иммунный электрофорез объединяет преимущества электрофореза и иммунной реакции: высокая разрешающая способность метода, разделяющая компоненты анализируемой системы на основе электрофоретической мобильности и высокая специфичность иммунных антисывороток. Электрофорез с иммунофиксацией — один из современнейших методов в кинической лаборатории для получения характеристик моноклональных иммуноглобулинов.
Моноклональная гаммопатия характеризуется неконтролируемой пролифирацией одного клона плазменных клеток за счет других клеток. Эта дисфункция часто приводит к синтезу большого количества одного иммуноглобулина или его субъединицы со снижением нормальных уровней иммуноглобулинов. При этом на электрофореграмме выявляется один резко увеличенный пик в бета-гамма-области (рис.2) .

Большинство моноклональных гаммопатий являюттся доброкачественными и не проявляют себя клинически. Однако, высокие уровни моноклонального протеина на фоне сниженных уровней других иммуноглобулинов могут быть ассоциированы с малигнизацией.
В последние годы участились парапротеинемические гемобластозы (миеломная болезнь, лимфоцитомия, лейкозы), когда на электрофореграмме может наблюдаться присутствие двух (и очень редко трех) моноклональных протеинов. Анализ протеинов абсолютно необходим в диагностике и мониторинге лимфопролиферативных заболеваний. При этом если иммуннохимический метод может выявить количественные отклонения протеиновой продукции, отмечая наличие расстройства в этой среде, то электрофорез в состоянии продемонстрировать моноклональную сущность этих нарушений. Однако, выявление того или иного варианта парапротеинемии на электрофоретической картине недостаточно для полной идентификации патологического процесса. В таких случаях необходимо использовать иммуноэлектрофорез.
Поликлональные гаммопатий в общих чертах характеризуются диффузным увеличением уровня протеина в гамма-регионе на электрофоретической пластине. Обычно концентрации трех главных иммуноглобулинов (IgG, IgA, IgM) соответственно увеличены (рис.3).

Обычно поликлональная гаммопатия наиболее часто встречаемое в клинике отклонение после гипоальбуминемии.
Сохраняющаяся поликлональная гаммопатия имеет определенную прогностическую значимость при ряде заболеваний: хроническая патология печени, коллагенозы, хронические инфекции, метастатистическая карцинома, ожоговая болезнь.
Снижением большинства или даже всех иммуноглобулинов характеризуется гипогаммоглобулинемия и агаммоглобулинемия (Рис.4).

Рис.4 Гипогаммаглобулинемия и агаммаглобулинемия Чаще всего это связано с наследственной патологией и проявляется уже в раннем детстве (синдром Вискотт-Алдриха, болезнь Брутона, атаксия).

Приобретенная недостаточность иммуноглобулинов во взрослом возрасте может быть вторичной, в виде моноклональной гаммопатии или быть индуцированной иммуносупрессивной терапией. Остановимся на электрофоретических характеристиках сывороточных протеинов при некоторых клинических проявлениях.
1. Острое воспаление. характеризующееся локализованным биохимическим ответом (активация комплемента) и реакцией на клеточном уровне (мобилизация фагоцитов, увеличение синтеза протеинов), дает при электрофорезе белков сыворотки увеличение уровней альфа 1-й альфа 2-глобулинов, фибриногена (рис.5).

Рис.5 Острое воспаление

2.Хроническое воспаление ассоциируется с увеличением фракций белков, рассматриваемых как «белки хронической фазы». Электрофоретически это будет проявляться умеренным увеличением альфа 2-глобулинов и легким увеличением бета-глобулинов. Альбумин может быть слегка подавлен на фоне поликлонального увеличения гамма глобулинов (рис.6).

Рис.6 Хроническое воспаление

Такие отклонения, характеризующие хроническое воспаление, могут проявляться при хронических инфекциях (бруцеллез, туберкулез и др. ), коллагенозах, аллергиях, аутоиммунных процессах, а также при малигнизации.
3. Заболевание печени. В связи с тем, что в печени синтезируются альбумин и альфа-глобулин, заболевания этого органа, затрагивающие белковосинтезирующую функцию могут сопровождаться снижением их уровней в крови, что соответственно отразится на электрофореграммах (рис.7).

Следует однако помнить, что печень обладает значительными резервами синтезирующей способности, поэтому выявление данных нарушений будет свидетельствовать о глубоких гепатоцеллюлярных нарушениях

4. Нефротический синдром может быть обусловлен различными патологическими процессами (диабет, заболевание соединительной ткани, гломерулонефриты и др.). Для данного синдрома характерна потеря большого количества альбумина в связи с нарушением фильтрационной способности почек. При этом альбумин и другие низкомолекулярные белки (трансферрин и альфа 1- антитрипсин) выходят через гломерулярные канальцы. Это сопровождается увеличением в крови уровней высокомолекулярных протеинов (макроглобулин, IgM, липопротеины). Электрофоретическая картина при этом выявляет существенное снижение пика альбумина и увеличение альфа 1- и альфа 2-глобулинов (рис.8).

5. Гастроэнтеропатическая гипопротеинемия.
Избыточная потеря альбумина и других протеинов может сопутствовать ряду заболеваний желудочно-кишечного тракта, причем клинические проявления зависят от глубины поражения и степени потери белков (рис.9).

Рис.9 Гастроэнтеропатическая гипопротеинемия

Выявляемый при обследований «протеиновый профиль» будет отражать основной патологический процесс.
Различные типы протеинурии могут быть дифференцированы с помощью электрофореза мочи (рис.10).

Рис.10 Нормальная электрофореграмма белков мочи

Выявление и дифференцировка плазменных белков в моче с помощью электрофореза является весьма информативным тестом в оценке почечной функции, нарушения которой могут быть обусловлены ослабленной канальцевой реабсорбцией, но в большинстве случаев являются результатом патологической проницаемости гломерулярных капилляров (8) (рис. 11 и 12).

 

Следует подчеркнуть возможность электрофоретического обследования цереброспинальной жидкости.
Продуцируясь путем ультрафильтрации плазмы, спинномозговая жидкость «обновляется» примерно 4 раза в сутки благодаря экскреции и реабсорбции через гемато-энцефалический барьер. Несмотря на внедрение в клиники нейрозаболеваний таких современных методов диагностики как компьютерная томография и ЯМРТ, исследование спинномозговой жидкости остается одним из ведущих методов клинической диагностики при заболеваниях нервной системы, помогая уточнить характер патологического процесса, особенности течения заболевания, его прогноз, контролировать эффективность лечения (4). Соотношение концентраций белков плазмы и цереброспинальной жидкости может свидетельствовать о той или иной степени проницаемости гемато-энцефалического барьера. Поэтому изучение статуса белков в цереброспинальной жидкости должно обязательно сопровождаться параллельным обследованием плазмы (рис.13).

Такой электрофоретический профиль является важным диагностическим аргументом при диагностике иммунопатологических процессов с неврологической аффектацией. Выявление олигоклональных групп при электрофорезе цереброспинальной жидкости — лучший и единственный на настоящее время тест для диагностики рассеянного склероза (1) (рис.14).

Специфические картины дает электрофорез цереброспинальной жидкости при нейросифилисе (Рис.15), менингите цитомегаловирусной этиологии (Рис.16), церебральном токсоплазмозе (Рис.17) (10).

  

Определение фракций белков-маркеров спинномозговой жидкости в динамике лечения черепно-мозговой травмы имеет существенное значение для современной и более точной диагностики, а также для обоснованного прогноза (2).
Из других биологических сред организма, используемых для электрофоретических тестов с целью установления диагноза, следует упомянуть плевральную, перикардиальную, синовиальную и слезную жидкости. Что касается электрофореза слезной жидкости, то в данном случае это один из наиболее информативных биохимических методов в диагностике патологичесих процессов слезных желез, т.к. фракции быстро мигрирующих белков (RMP), лактотрансферрин (Ltt) и лизозим (Lys), синтезируемые слезными железами, образуют три основных пика на целлюлез-ацетатной электрофореграмме (Рис. 18).

Дисфункция слезных желез приводит к снижению синтеза одного или нескольких из этих белков, что отчетливо проявляется в процессе электрофореза. Причем, изменение нормальных фракций или даже появление новых может проявляться у здоровых субъектов и объясняться использованием не достаточно качественных контактных лиз (Рис.19).

Другой областью широкого клинико-лабораторного использования электрофореза является изучение липидного профиля. Клиническая значимость данного теста возрастает в последнее время параллельно увеличивающейся статистике сердечно-сосудистых заболеваний. Точное определение фенотипа дислипопротеинемии абсолютно необходимо для обоснования патогенетического лечения и обоснованного прогноза, т.к. лечение гиперлипидемий зависит от фенотипа. Классическое исследование фенотипов связано в первую очередь с определением холестерина и триглицеридов в крови, однако, этого далеко не достаточно. Электрофорез разделяет липопротеины на альфа (HDL), пре-бета (VLDL), бета (LDL) и иногда хиломинроны. В добавление к 4 главным липидным фракциям при использовании агарозного или полиакрил амид ного геля могут быть определены: липопротеины промежуточной плотности (JDL), липопротеин(а), липопротеин-Х (абнормальный липопротеин, который появляется при холестазе или при обогащенном липидами парэнтеральном питании). Классификация и идентификация гиперлипидемий основаны на определении липидного спектра сыворотки крови.
Предложенные Фредриксоном классификации липидных фенотипов включает 5 типов, прекрасно дифференцируемых с помощью электрофореза (Рис.20).

Рис.20 Фенотипы гиперлипидемий

Электрофорез изоэнзимов.

Изоэнзимы, являющиеся молекулярными вариациями некоторых ферментов, имеют идентичную каталитическую активность, но различаются пространственной конфигурацией. Отличаясь электрофоретической мобильностью, эти молекулы разделяются, характеризуя специфическую ферментативную активность определенного органа. Наибольшую диагностическую значимость приобретает интерпретация электрофореза изоэнзимов креатинфосфокиназы (КФК), лактатдегидрогеназы (ЛДГ) и щелочной фосфатазы (ЩФ).

Креатинкиназа имеет три изоформы: СК-ММ (в скелетной мускулатуре), СК-ВВ (в мозгу) и СК-МВ (в миокарде).
В последнее время выделен еще митохондриальный изоэнзим (СКт), который характеризуется отсутствием М и В субъединиц, аффинностью к креатинфосфату и стабильностью при нагревании (5 минут при 56 С). Высокое содержание митохондриального изоэнзима обнаружено в сыворотке большинства больных с неопластическими процессами. СКт рассматривается как маркер корциномы в метастатической стадии развития, являясь настораживающим прогностическим индикатором. Выявление данного изоэнзима у новорожденных указывает на митохондриальную гиперактивность и тканевую гипоксию. Электрофорез креатинкиназы — референтный метод для определения кардиальных энзимов, являющийся быстрым и точным тестом для документации острого инфаркта миокарда (9). Увеличение активности СК-МВ (более чем 5% от тотальной) при ранних клинических проявлениях ишемий миокарда предполагает в дальнейшем мониторинг активности изоэнзима каждые 3 часа в течение суток, что наряду с уточнением диагноза указывает на эффективность терапии (Рис. 21).

Рис.21 Массивный инфаркт миокарда

В последнее время СК-МВ разделяют на 2 изоформы: СК-МВ 1 и СК-МВ2.

СК-МВ2 — тканевая форма, которая попадая в кровоток, конвертируется в МВ1, поэтому изменение соотношения МВ2/МВ1 через 1-2 часа после начала болевого синдрома может документировать наличие инфаркта. Таким образом, высочайшая кардиоспецифичность изоформ дает максимально раннюю информацию о нарушениях миокарда и возможность своевременного применения тромболитической терапии.
Одной из наиболее удобных для этой цели систем является прелагаемая фирмой Helena France система Cardio Rep. В автоматическом режиме в течение 18 минут с высокой чувствительностью (96%) и специфичностью (94%) выдаются результаты определения 3 изоформ, являющихся дереватами СК-ММ и двух от СК-МВ: МВ2, соотношение МВ2 к MB 1, общая активность СК-МВ и %МВ.
Щелочная фосфатаза — фермент существующий фактически во всех органах и тканях, однако, печень, кости и кишечник имеют свои органоспецифические изоферменты. В связи с тем, что щелочная фосфатаза широко распространена в различных тканях, определение в крови тотальной активности данного фермента мало информативно. С этой точки зрения становится понятной значимость определения раздельных ихоэнзимов, активность которых в том или ином органе уникальна. Иоэнзимы щелочной фосфатазы отличается физико-химическими и электрофоретическими свойствами, что и создает возможности для их идентификации с помощью электрофореза, где наряду с разделением печеночных, костных, кишечных и плацентраных изоэнзимов в сыворотке могут быть выделены еще такие изоэнзимы, как : макрогепатические, ренальные, Nagao.
Таким образом, электрофоретическое разделение изоферментных форм позволяет идентифицировать патологию того или иного органа, активно включаясь в диагностический процесс.

Электрофорез гемоглобина
Гемоглобинопатии — генетически детерменированные аномалии, характеризующиеся количественными или качественными вариациями гемоглобина. К настоящему времени у человека идентифицированы более 200 анормальных гемоглобинов. Наибольшее клиническое значение из них имеют гемоглобины S (депраноциты), С, D и Е. Электрофорез как способ диагностики заболеваний, связанных с выявлением той или иной формы гемоглобинопатии на современном этапе является самым информативным методом. Так выявление на электрофореграмме депраноцитоза (Hb S) свидетельствует о наличии серпавидноклеточной анемии. Гетерозиготные формы гемоглобинопатии с НЬС и НЬЕ наиболее часто встречающиеся в Западной Африке и на Востоке чаще всего не имеют клинической манифистации. Группа гемоглобинопатии, при которых отсутствует или снижается продукция одной или более глобиновых цепей, называется талассемия. При этом нарушение происходит не в структуре цепи, а в дефиците синтеза цепи, как правило бетта-цепи реже альфа-цепи. Существует много вариантов талассемий, при чем иногда талассимия сочетается с другими гемоглобинопатиями, серповидноклеточная талассемия — наиболее частое сочетание.
Внедрение электрофореза в неонатальную скрининговую программу, а также обследование семейных пар на выявление риска генетических патологий гемоглобина у планируемого ребенка позволяет насторожить родителей о возможных проблемах до появления тяжелых симптомов, таких как серповидно-клеточная анемия и др. Нельзя не упомянуть о электрофоретическом количественном измерении гликированного гемоглобина.
Гликозилированный гемоглобин (HbAl) компонуется из 5 фракций (HbAla, HbAlb, HbAlc, HbAld и HbAle) и в норме составляет от 5 до 8 % тотального гемоглобина.
Наибольший интерес представляет HbAlc. В структуре которого N-терминал аминокислоты соединен с молекулой глюкозы и составляет 4-6 % тотального гемоглобина, т.е. основную часть гликированных форм гемоглобина (HbAla — 0,2%, HbAlb — 0,5 %, HbAld — 0,2%). Гликирование — это медленный, необратимый, неферментативный процесс, в результате которого гемоглобин теряет кислороднесущую функцию на период всей жизни эритроцитов (120 дней). В связи с этим пропорционально времени и концентрации глюкозы содержание гликированного гемоглобина в крови отражает гликемический статус за предыдущие тестированию 3 месяца, в то время, как измерение глюкозы в крови отражает гликемию в момент взятия крови.
Таким образом для выявления преддиабетических состояний и оценки антидиабетической терапии абсолютно необходимо определениеНЬА1с (рис. 22).

Рис.22 Нормальная электрофореграмма гликированного гемоглобина

Мощный технический прогресс последних десятилетий и развитие коммерционализации в медицине дали толчок для развития новейших технологий на базе известных принципов электрофореза. Диагностическая значимость данного метода подтверждается огромным разнообразием выпускаемых в настоящее время систем для электрофореза. Причем, наряду с такими мощными лидерами в производстве, как Helena Laboratories (Франция) или Beckman (США), где лишь перечень выпускаемого оборудования составляет десятки страниц предлагаются и небольшие автоматические денситометры простые в эксплуатации, предназначенные для рутинных исследований белковых фракций (Biosystems, Испания). Широкий спектр современных приборов основан на знании клинических потребностей в различных областях медицины, вплоть до самых узких диагностических задач и на современнейших технологиях, позволяющих создавать полностью автоматизированные системы для электрофореза (REP 3, Helena Laboratories, Франция; Biomek 2000, Beckman, США). Новинкой являются предлагаемые системы для капиллярного электрофореза (CES I, PrinCE, Helena Laboratories, Франция; Paragon CZE 2000, Beckman, США). Автоматические системы капиллярного электрофореза выполняют быстрое разделение биомолекул с высокой разрешающей способностью на фемтомолярном уровне (10 15 моля) из нанолитровых объемов (10 9 литра) образца. Электрофоретическое разделение макромолекул происходит внутри капилляра под воздействием высокого напряжения. Работа систем полностью контролируется компьютером.
Использование современных электрофоретических анализаторов позволяет с высокой точностью и минимальными трудозатратами исследовать широчайший спектр биохимических параметров с целью уточнения диагноза, мониторинга патологического процесса и обоснования патогенетической терапии.
Возможность упростить процесс обработки обширной и разносторонней информации, получаемой в результате электрофоретических и других исследований дает использование лабораторной компьютерной системы (Рис. 23).

Рис.23 Типичный экран лабораторной компьютерной системы при выборе электрофоретических исследований

Компьютера в лаборатории не надо бояться. Его намного быстрее и легче освоить, чем заполнять вручную многочисленные журналы, бланки, направления, отчеты и т.д. Кроме того, систематизация лабораторной информации, начиная с кодирования пробирок с образцами и кончая архивированием обработанных данных значительно увеличивает точность исследований, повышая производительность лаборатории в целом и эффективность ее взаимодействия с лечебными отделениями.
Таким образом, далеко не полный перечень возможностей клинического применения электрофореза, дает лишь общее представление о незаменимой роли данного метода для дифференцировки патологических отклонений в сложном процессе диагностических обследований.
Вопросы для самоконтроля.

  1. Основной принцип электрофоретического разделения.
  2. Фракционный состав типичной электрофореграммы протеинов.
  3. Основная цель электрофореза с иммуннофиксацией.
  4. Характеристика электрофореграмм при гиперлипидемиях.
  5. Клиническое значение электрофореза изоферментов креатинфосфокиназы.
  6. Основные точки приложения электрофореза в диагностике гемоглобинопатии.
  7. Наиболее современные направления технологий электрофореза.

Список литературы

Иллюстративные и графические материалы любезно представлены компанией Helena Laboratories (Франция) и научно производственным объединением «АЛТЭЙ» (Москва).

  1. Гусев Е.И., Демина Т.Л., Бойко А.Н.
    «Рассеянный склероз», г.Москва, 1997 г.
  2. Куксинский В.А., Чурляев Ю.А., Никифорова Н.В. и др.
    «Содержание белков-маркеров спинномозговой жидкости при тяжелой черепно-мозговой травме» — Клиническая лабораторная диагностика, 1997 г., №11, стр.11-13
  3. Джорджеску П., Пэунеску Е.
    «Биохимические методы диагноза и исследования»,
    Бухарест, 1963 г. , стр. 84-106
  4. Эйнштейн Э.Р.
    «Белки мозга и спинномозговой жидкости в норме и патологии; пер. с англ. — М., 1988 г.
  5. Alper, С.A., Plasma Protein Measurements as a Diagnostics Aid, N.Eng.J.Med., 291:287, 1974
  6. Alper, C.A., Johnson, A.M., Immunofixation Electrophoresis: a Technique for the Study of Protein Polymorphism. Vo Sang 17: 445-452, 1969
  7. Killingsworth, L.M., Plasma Protein Natterns in Health and Lisease, CRC Crit. Rev. in Clin. Lab. Sci, August, 1979
  8. Killingsworth, L.M. etal., «Protein Analysis, Diag. Med, 3-15, Jan/Feb, 1980
  9. Marmor, A etal., The MB Isoenzyme of Creatine Kinase as an Indicator of Severity of Myocardialschemia, Lancet, Oct. 812-814, 1978
  10. Pitzmann, S.E., Daniels, J.E., Serum Protein abnormalities: Diagnostic and Clinical aspects; Allen Less Co., 1982
  11. Tiselius, A., A New apporoach for Electrophoretic Analysis of Colloidal Mixtures, Trans Faraday Soc, 33:524, 1937

Терминология.

Что такое электрофорез ?

Под электрофорезом понимают процесс разделения заряженных частиц в электрическом поле. Многие биологически важные молекулы (белки, аминокислоты, нуклеиновые кислоты и др.) имеют в своем составе ионизирующие группы. Поэтому в биологических жидкостях (крови, лимфе и др.) они существуют в виде катионов и анионов. Помимо этого, молекулы имеющие примерно одинаковый заряд могут отличаться молекулярными массами и отношением заряда к массе. На этих различиях и основано разделение ионов при движении их в растворе под действием электрического поля.

Скорость перемещения зависит от величины заряда, а также в ряде случаев, от размера и формы молекул. Так как в большинстве случаев молекулы отличаются по своим физическим и химическим свойствам, то очень немногие из них имеют одинаковую электрофоретическую подвижность. Скорость движения частиц (см/с) при напряженности электрического поля 1 В/см называется электрофоретической подвижностью.

В зависимости от способа проведения электрофореза его делят на свободный или фронтальный, когда электрофоретическое разделение осуществляется в водной фазе и зональный, т.е. электрофорез на поддерживающей среде, когда разделение осуществляется на каком-либо инертном носителе (бумага, асбестовые пластины, целлюлоза, агаровый, крахмальный и полиакриламидный гели и др.).

Суть зонального электрофореза заключается в том, что раствор смеси веществ, подлежащих разделению вводят на определенный участок носителя, пропитанного электролитом. Биологический материал, подлежащий электрофоретическому разделению, растворяют или суспензируют в буфере, чтобы обеспечить проведение электрического тока, этим же буфером насыщают и носитель. В растворе между электродами ток обусловлен ионами буфера и образца, в остальной части цепи — электронами. После снятия электрического поля ионы исследуемой смеси распределятся в соответствии с их электрофоретической подвижностью. В клинико-лабораторных исследованиях чаще используется зональный электрофорез на агаре или полиакриламидном геле. При наложении электрического поля частицы подлежащей разделению смеси придут в состояние направленного движения (будут двигаться к противоположно заряженному полюсу) и распределятся на носителе в виде отчетливых зон, которые легко обнаружить соответствующим аналитическим методом.

Важными характеристиками процесса зонального электрофореза являются градиент потенциала (В/см) и сила тока, приходящаяся на 1 см поперечного сечения полосы (плотность тока — мА/см). Под градиентом потенциала понимают падение напряжения на 1 см носителя, расположенного между электродами. В зависимости от градиента потенциала различают низковольтный электрофорез (5-15 В/см) и высоковольтный (более 50 В/см). Низковольтный электрофорез используется для разделения высокомолекулярных соединений типа белков, липопротеинов, гликопротеинов и др. Высоковольтный электрофорез используется для разделения низкомолекулярных веществ, типа аминокислот, их производных и др. Так как различие в заряде и молекулярной массе у таких веществ невелико, то нужен большой градиент потенциала, чтобы произошло эффективное разделение частиц. Так как при этом происходит значительное разогревание носителя, требуются специальные устройства для его охлаждения.

В зависимости от целей исследования электрофорез делят на аналитический и препаративный. В клинико-биохимических исследованиях используют обычно аналитический электрофорез, который позволяет работать с очень небольшими количествами исследуемого вещества и вести их количественное определение. В тех случаях, когда требуется получить большое количество изучаемого вещества, необходимого для дальнейших исследований используют препаративный вариант электрофореза. Капиллярный электрофорез предполагает быстрое разделение с исключительной эффективностью и разрешением для аналитических задач, особенно когда возникают трудности при использовании жидкостной хроматографии.

Система капиллярного электрофореза показывает беспрецедентную ВЭЖХ — подобную чувствительность для широкого ряда аналитических задач. Преимущество капиллярного электрофореза в том, что для проведения различных методов разделения используется один прибор. Это делает капиллярный электрофорез очень гибким инструментом для широкого ряда различных применений при решении задач разделения.

В настоящее время для анализа биологических смесей все шире используется капиллярный электрофорез, при котором электрофоретическое разделение проводится в тонких капиллярах диаметром 25-200 мкм и длинной 10-100 см, заполненных буферным раствором. Под действием электрического поля (электрофорез проводится при напряжении 10000-30000 В) в капилляре создается электроосмотический поток, направленный к отрицательному полюсу, вместе с которым перемешаются и компоненты, подлежащие разделению. В зависимости от заряда и массы скорость их движения будет различной, что приводит к фракционированию смеси. В концевой точке капилляра разделенные компоненты количественно определяют, используя различные оптические детекторы Близким к электрофорезу является метод изоэлектрического фокусирования, когда разделение белков и некоторых других анализируемых веществ идет в зависимости от величины их изоэлектрических точек.

Изоэлектрической точкой называют такое состояние белковой молекулы, при котором ее суммарный заряд равен нулю. В методе изоэлектрического фокусирования вначале между электродами устанавливают градиент рН с помощью веществ особой химической природы, получивших название амфолитов-носителей. Заряженные молекулы белков в ходе опыта будут двигаться в направлении противоположно заряженного электрода в соответствии с их действительным зарядом. Так как молекулы белков амфотерны, то при перемещении в градиенте рН их суммарный заряд будет меняться до тех пор, пока он не станет равным 0. Это произойдет в том месте, где величина рН будет равна изоэлектрической точке. Поэтому молекулы с одинаковой изоэлектрической точкой сконцентрируются в одной узкой зоне.

Электрофорез

Очень популярный метод физиотерапии с использованием электрического тока. Этот метод известен уже более 100 лет. Постоянный электрический ток оказывает терапевтическое воздействие на весь организм или местно, его назначают как с лекарственным препаратом, так и без, в зависимости от заболевания. Электрофорез полностью безопасен, а процедура безболезненна, так как силу тока подбирают индивидуально для каждого пациента ориентируясь на чувствительность организма. 

Суть метода терапии электрофорезом 

Суть метода заключается в превращении лекарственного препарата в электрически заряженные частицы. Они проникают в кожу и распространяются через слизистые и кровеносную систему.

Одна часть препарата накапливается в необходимой области, а другая через ток крови распространяется по всему организму.

Преимуществом электрофореза является введение лекарственного препарата на прямую в пораженную область через слизистые, не нагружая печень и почки. Это означает, что для достижения необходимого эффекта требуется применять препарат в меньшей концентрации, а так же следует выделить — тот факт, что удерживается в тканях при таком введении препарат дольше, а значит и терапия этим методом имеет ярко выраженный пролонгированный эффект.  

Основными терапевтическими свойствами лекарственного электрофореза являются: 

  • уменьшение воспаления, отеков, болей; 
  • расслабление мышц; 
  • улучшение микроциркуляции в тканях и их регенерации; 
  • активизация защитных сил организма и др.  

В нашем центре физиотерапию электрофорезом проводит врач физиотерапевт — реабилитолог.

Врач физиотерапевт

Прием врача

Взрослые и дети 0+

Запись по телефону: 8-918-9-555-220 или через форму обратной связи на сайте.   

Стоимость

  • Физио процедура электрофорез от 550р
  • Курс физио процедур электрофорез № 10 от 5000р
  • Физио процедура электрофорез для детей до 12 лет от 350р
  • Курс физио процедур электрофорез № 10 для детей до 12 лет от 3000р

Когда назначают процедуру электрофорез?

Благодаря своим свойствам электрофорез широко применяется в комплексной терапии при различных заболеваниях. Чаше всего электрофорез назначают врачи: невролог, отоларинголог, терапевт, гинеколог, хирург и конечно же педиатр.

Электрофорез в Краснодаре назначается при широком спектре заболеваний:

  • ЛОР органов; 
  • дыхательной системы; 
  • желудочно-кишечного тракта; 
  • неврологических заболеваниях;
  • заболеваниях сердечно-сосудистой системы;
  • заболеваниях мочеполовой системы; 
  • эндокринной системы; 
  • заболеваниях опорно-двигательного аппарата и др. 

Как проходит процедура?

Электрофорез, как и любая другая физиотерапевтическая процедура имеет некоторые противопоказания, поэтому перед процедурой врач физиотерапевт проведет осмотр и опрос пациента, свериться с направлением.

При отсутствии противопоказаний, врач проведет процедуру, которая занимает от 10 до 30 минут в зависимости от назначения. Пациента попросят снять одежду и лечь на кушетку,  затем на область в соответствии с рекомендацией лечащего врача наложат специальные электроды с пропитанным лекарством прокладкой и зафиксируют для лучшего контакта и выставят силу тока и  время. Аппарат для электрофореза будет подавать постоянный электрический импульс, что проявляется легким покалыванием. 

Для грудничков, эта процедура проводиться на специальном столике с матрасиком и бортиками, а электроды фиксируются эластичной сеточкой. 

Врачи назначают курс физиотерапии лекарственным электрофорезом от 5 до 15 процедур. Частота выполнения — ежедневно или через день, подбирается индивидуально и зависит не только от показаний, но и от самочувствия пациента.   

Противопоказания к проведению лекарственного электрофореза

Новообразования, декомпенсация хронических заболеваний, острые лихорадочные состояния, гнойные процессы без оттока содержимого, индивидуальная непереносимость тока или лекарственного вещества, психические нарушения, чувствительные нарушения, общее тяжелое состояние пациента, афазия, выраженные изменения кожного покрова в области проведения процедуры, склонность к кровотечениям.  

Где можно сделать электрофарез в Краснодаре

Мы принимаем по адресу: г. Краснодар, мкр-н Молодежный, ул. 2-я Целиноградская д.44 корпус 2, офис 45 (р-н Витаминкомбината)

лазер Матрикс, электрофорез, магнитотерапия в г. Рязань

Наш медицинский центр предоставляет услуги по физиотерапии. Воспользоваться услугой можно, как в рамках комплексного лечения в урологии и проктологии, так и по направлению из вашего лечебного учреждения.

Лазерные аппараты Матрикс при своем применении воздействуют не только на конкретный орган или участок тела, но и на общее состояние организма. Поэтому нельзя сказать, что их воздействие затрагивает только ту часть тела, на которую направлено их излучение. Неважно, какую болезнь или травму лечит человек с помощью лазера, этот аппарат также повышает его иммунитет и улучшает его общее состояние.

 

В урологии применяется в комплексном лечении:

  • хронического простатита
  • эректильной дисфункции.
  • В проктологии:

  • при анальных трещинах
  • геморрое
  • анальном зуде.
  • В гинекологии используется для улучшения качества эндометрия, например, при бесплодии.

    Электрофорез

    Электрофорез с калием йодидом и лидазой применяется при лечении хронического простатита, с лидазой — при спаечных процессах в области малого таза.

     

    Лекарственный электрофорез – это воздействие на организм постоянным электрическим током в сочетании с введением через кожу или слизистые оболочки разнообразных лекарственных веществ

    . В физиотерапии электрофорез является наиболее популярным методом, так как оказывает на организм больного множество положительных эффектов.

    Магнитотерапия

    Магнитотерапия является проверенным временем методом альтернативной медицины. Несмотря на то, что процедура оказывае положительный эффект на организм, применяется она только по строгому назначению лечащего врача.

    Наиболее часто назначают магнитотерапию для суставов, после переломов, при остеохондрозе позвоночника, в гинекологии для купирования болевого синдрома, рассасывающего эффекта и противовоспалительного действия при эндометрите, миоме матки, эндометриозе, простатите и эректильной дисфункции.

    В нашей клинике магнитотерапию проводят аппаратом Мавит.

    Мы всегда Вам рады!

    Забор некоторых анализов требует от пациента специальной подготовки или определенных условий. Вы можете пройти обследование и получить достоверный результат, если станете придерживаться правил подготовки к урологическим исследования.

    Мазки на инфекции
    Забор берётся из мочеиспускательного канала. Перед анализом нельзя мочиться как минимум один час.
    Забор секрета предстательной железы
    Выполняется после массажа. Пациенту следует воздержать от половой жизни в течение суток, чтобы специалист мог гарантированно получить секрет.
    Сбор посева спермы
    Собирается в домашних условиях. Пациенту обязательно тщательно подготовиться и провести качественную гигиену половых органов.
    Спермограмма
    Требует специальной подготовки. Сперма сдается в лаборатории. До анализа нельзя заниматься сексом 2 дня. Последний половой контакт должен быть не позднее 5 дней до проведения спермограммы. 7 дней до анализа нельзя ходить в сауну или париться в бане. За сутки до процедуры исключайте курение, алкоголь.
    Внутривенная урография
    Для достоверных результатов исключаем на 2 дня продукты, которые способствуют выделению газов в кишечнике. Нельзя есть капусту, горох, черный хлеб, овощные салаты, соки, компоты и молоко. Следует за 2 дня до анализа принимать газопоглащающие препараты (активированный уголь, эспумизан или смекту). Старайтесь меньше пить воды и не переедайте накануне. Если у вас сахарный диабет следует согласовать с эндокринологом отмену на 2 суток бигуанидов. Необходимо провести очистительную клизму накануне и в день проведения процедуры. Клизму можно заменить на препарат Фортранс.

    Более подробную информацию о том, как подготовиться к проведению урологических исследований вы получите от своего лечащего врача на консультации!

    • Сдача натощак. Не есть минимум за 8 часов до сдачи.
    • Можно пить воду. На результатах это не отразится.
    • За сутки исключить алкоголь, не подвергать себя физическим и психологическим нагрузкам.
    • За 2 часа до анализа не курить.
    • Кровь сдают не раньше, чем через 10 дней после отмены лекарств. Исключение — исследование концентрации лекарств в крови.
    • Сдавать в стерильный контейнер.
    • Накануне не есть пищу, которая может окрасить мочу.
    • Не сдавать мочу во время приёма лекарств.
    • Женщинам лучше подождать, пока закончится менструация.
    • Перед сбором обязательно провести гигиенические процедуры.
    • Собрать утреннюю порцию сразу после сна.
    • Закрыть контейнер плотно и доставить в лабораторию в течение 1-2 часов.
    • Собирается в течение суток.
    • Первая порция мочи удаляется.
    • Все последующие порции мочи за 24 часа собирают в одну емкость.
    • Хранят мочу в прохладном месте (до +8градусов).
    • После сбора измеряете объем, перемешиваете мочу в обязательном порядке и переливаете 50 мл в стерильный контейнер, которые несете на исследование.
    • Перед сдачей необходимо провести гигиену половых органов
    • Берется утренняя порция сразу после сна.
    • Для анализа нужна строго только средняя порция мочи.
    • Отправить в лабораторию не позднее 2 часов после сдачи.
    • Моча собирается в 8 отельных контейнеров через каждые три часа.
    • Не стоит пить воды больше, чем обычно.
    • Первая порция для анализов не нужна.
    • Собирают сразу после дефекации
    • Туалетную бумагу для сбора не использовать.
    • Следить, чтобы моча не попала в кал.
    • Доставить в лабораторию в течение 1-2-х часов.

    Врачи-физиотерапевты

    Отзывы наших пациентов

    Очень благодарна Артуру Константиновичу за проведение цистоскопии. Прочитав много отзывов об этой процедуре, решила, что без наркоза ее просто не переживу. Времени у меня было немного, найти где проведут цистоскопию с наркозом мне не удалось и я шла на ее выполнение практически как «на расстрел». Я была просто поражена, насколько аккуратно и безболезненно Артур Константинович провел мне цистоскопию и конечно, было приятно его вежливое, заботливое отношение. Никаких последующих неприятностей (болей в животе, боли про мочеиспускании) у меня тоже не было. Спасибо огромное доктору, я очень довольна, что попала именно к нему и рекомендую его всем пациентам, кому необходимо пройти цистоскопию.

    31 октября, 2020 г.

    Все отзывы →

    Электрофорез зубов: применение и противопоказания.

    Наши пациенты часто спрашивают об электрофорезе зубов: что это такое, в каких случаях применяется данная процедура и какие существуют противопоказания к ее применению.

    Отвечаем: электрофорез – это физиотерапевтический метод лечения, который заключается во введении в организм лекарственного вещества посредством применения электрического тока.

    При электрофорезе используются особые лекарственные средства, которые способны распадаться на ионы под влиянием тока и направленно проникать в организм, скапливаясь в больном органе и оказывая на него максимальное терапевтическое воздействие.

    Показания к назначению электрофореза зубов:

    • Пульпит
    • Периодонтит
    • Кисты и гранулемы зуба
    • Альвеолит (воспаление зубной ячейки)
    • Боль после удаления или лечения зубов

    О процедуре

    Процедура выполняется безболезненно и дает возможность быстро снять воспаление внутри зубного канала и в тканях, окружающих верхушку зуба, а также оказывает бактерицидное воздействие на ткани, устраняя очаги инфекции. В сложных случаях стоматологи назначают именно электрофорез зубов, потому что это такой метод лечения, который позволяет накопить лекарственные средства в самом очаге воспаления и заметно увеличить их эффективность. Лекарства, вводимые методом электрофореза, выводятся медленнее и сохраняют лечебный эффект в течение нескольких недель, при этом риск развития аллергических реакций минимальный.

    Единственный недостаток метода – наличие ряда противопоказаний. Электрофорез зубов можно назначать далеко не всем, поскольку при некоторых заболеваниях и состояниях пациента процедура строго противопоказана:

    • Острые болезни сердечно-сосудистой системы
    • Наличие кардиостимулятора
    • Бронхиальная астма
    • Аллергия на вводимые препараты
    • Онкологические заболевания
    • Воспалительные заболевания и гнойные процессы в организме

    Вот как выглядит на практике процедура электрофореза зубов: в лекарственном средстве смачивается специальная прокладка, затем она фиксируется на больном месте. Если необходимо лечение пульпита, то обрабатываются каналы и препарат вводится внутрь зуба. Далее с помощью специального аппарата производится воздействие током слабой силы на ткани ротовой полости через накладку с лекарством.

    Вся процедура длится 10-30 минут, а курс лечения занимает от 10 до 20 процедур, выполняемых ежедневно или через день.

    Если у вас возникла проблема, похожая на описанную в данной статье, обязательно обратитесь к нашим специалистам. Не ставьте диагноз самостоятельно!

    Почему стоит позвонить нам сейчас:

    • Ответим на все ваши вопросы за 3 минуты
    • Бесплатная консультация
    • Средний стаж работы врачей – 12 лет
    • Удобство расположения клиник

    Читайте также:

    Что такое депульпирование зуба?

    Лечение десен

    Электрофорез гемоглобина для диагностики гемоглобинопатий

    Электрофорез гемоглобина в щелочном геле позволяет определить процентное содержание основных изоформ гемоглобина и провести скрининг гемоглобинопатий. В норме в крови взрослого человека не менее 96,5 % гемоглобина представлено изоформой HbA, которая состоит из двух пар полипептидных цепей (глобинов): 2α и 2β, каждая из которых связана с гемом. Гемоглобинопатии связаны с наличием аномального варианта гемоглобина. Посредством электрофореза гемоглобина можно проводить скрининг состояний, связанных со структурными аномалиями гемоглобина. При этом метод не позволяет установить тип и характер гемоглобинопатии.

    Синонимы английские

    Serum Hemoglobin Electrophoresis.

    Метод исследования

    Электрофорез и денситометрия.

    Единицы измерения

    Мг/дл (миллиграмм на децилитр).

    Какой биоматериал можно использовать для исследования?

    Венозную кровь.

    Как правильно подготовиться к исследованию?

    • Не курить в течение 30 минут до исследования.

    Общая информация об исследовании

    Электрофорез гемоглобина в щелочном геле позволяет определить процентное содержание основных изоформ гемоглобина и провести скрининг гемоглобинопатий. В норме в крови взрослого человека не менее 96,5 % гемоглобина представлено изоформой HbA, которая состоит из двух пар полипептидных цепей (глобинов) — 2α и 2β, — каждая из которых связана с гемом. HbA обеспечивает адекватный газообмен и тканевую оксигенацию. Фракция HbA2 — второстепенная форма гемоглобина, имеет формулу 2α2δ. Также у взрослого допустимо наличие следовых количеств фетального гемоглобина HbF (2α2γ), который является преобладающей фракцией в течение внутриутробного периода. В течение первых 6 месяцев жизни HbF замещается HbA.

    Нарушения структуры гемоглобина обычно разделяют на две группы: гемоглобинопатии и талассемии, хотя талассемии являются формой гемоглобинопатии. Талассемии представляют собой нарушения синтеза α-, β- или обеих цепей гемоглобина. Также могут отмечаться нарушения синтеза δ-, γ- цепей. Большинство вариантов α- и β-талассемий сопровождается изменением уровня HbF и HbA2, поэтому определение этих изоформ может быть использовано для скрининга этих состояний.

    Остальные гемоглобинопатии связаны с наличием аномального варианта гемоглобина. Наиболее распространённые и клинически значимые аномальные варианты гемоглобина: S, D, E, C. Варианты HbS и HbD  — патологические формы гемоглобина, которые обладают идентичной миграцией в щелочном геле и являются результатом точечных мутаций гена, кодирующего β-глобин. Варианты Е и С при данном методе мигрируют в составе фракции HbA2, при их наличии фракция HbA2 достигает более 25 %. Наибольшее клиническое значение представляет HbS-вариант, который приводит к серповидноклеточной анемии.

    Электрофорез гемоглобина в щелочном геле позволяет проводить скрининг состояний, связанных со структурными аномалиями гемоглобина. При этом метод не позволяет установить тип и характер гемоглобинопатии.

    Электрофорез является чувствительным методом, с помощью которого можно исключить гемоглобинопатии либо определить тактику дальнейшего обследования для установления точного диагноза заболевания. Метод характеризуется высокой внутрипостановочной (SD

    Метод исследования основан на электрофорезе гемоглобина, полученного при лизисе отмытых эритроцитов обследуемого. После разделения гемоглобина на фракции производится окрашивание зон миграции. Содержание гемоглобина в составе фракций измеряется с помощью цифровой денситометрии.

    Когда назначается исследование?

    • Скрининг гемоглобинопатий;
    • наличие семейного анамнеза гемоглобинопатий, планирование семьи;
    • микроцитарная анемия, не связанная с дефицитом железа;
    • гемолитическая анемия неустановленной этиологии;
    • обнаружение изменённых эритроцитов (серповидная деформация) при микроскопическом исследовании крови.

    Что означают результаты?

    Референсные значения

    Компонент

    Возраст

    Референсные значения, %

    Гемоглобин HbA

    5,9 — 77,2

    1 — 3 мес.

    7,9 — 92,4

    3 — 6 мес.

    54,7 — 97,1

    6 — 9 мес.

    80,0 — 98,0

    9 — 13 мес.

    86,2 — 98,0

    13 — 24 мес.

    88,8 — 98,0

    > 2 лет

    ≥ 96,50

    Гемоглобин HbA2

    0,0 — 2,1

    1 — 3 мес.

    0,0 — 2,6

    3 — 6 мес.

    1,3 — 3,1

    6 — 24 мес.

    2,0 — 3,3

    > 2 лет

    ≤ 3,5

    Гемоглобин HbF

    22,8 — 92,0

    1 — 3 мес.

    7,6 — 89,8

    3 — 6 мес.

    1,6 — 42,2

    6 — 9 мес.

    0,0 — 16,7

    9 — 13 мес.

    0,0 — 10,5

    13 — 18 мес.

    0,0 — 7,9

    18 — 24 мес.

    0,0 — 6,3

    > 2 лет

    Аномальные варианты гемоглобина

     

    Не обнаружены

    Заключение

     

    Уровень HbA, HbA2, HbF cоответствует возрастным нормам, патологические формы гемоглобина не выявлены

    Понимание и интерпретация электрофореза сывороточного протеина

    ТЕОДОР X. О’КОННЕЛЛ, доктор медицины, ТИМОТИ Дж. Хорита, доктор медицины, и БАРСАМ КАСРАВИ, доктор медицины, Программа резидентуры по семейной медицине Kaiser Permanente Woodland Hills, Woodland Hills, California

    Am Врач. , 1 января 2005 г .; 71 (1): 105-112.

    Электрофорез сывороточного белка используется для идентификации пациентов с множественной миеломой и другими нарушениями сывороточного белка. Электрофорез разделяет белки на основе их физических свойств, и подмножества этих белков используются для интерпретации результатов.Уровни белка в плазме демонстрируют вполне предсказуемые изменения в ответ на острое воспаление, злокачественные новообразования, травмы, некроз, инфаркт, ожоги и химические повреждения. Однородный пик в виде шипа в фокальной области зоны гамма-глобулина указывает на моноклональную гаммапатию. Моноклональные гаммопатии связаны с клональным процессом, который является злокачественным или потенциально злокачественным, включая множественную миелому, макроглобулинемию Вальденстрема, одиночную плазмоцитому, тлеющую множественную миелому, моноклональную гаммопатию неопределенного значения, лейкоз плазматических клеток, болезнь тяжелых цепей и амилоидоз.Количество белка М, результаты биопсии костного мозга и другие характеристики могут помочь дифференцировать множественную миелому от других причин моноклональной гаммопатии. Напротив, поликлональные гаммопатии могут быть вызваны любым реактивным или воспалительным процессом.

    Электрофорез сывороточного белка — это лабораторное исследование, которое обычно используется для выявления пациентов с множественной миеломой и другими нарушениями сывороточного белка. Многие узкие специалисты включают электрофорез сывороточного протеина в начальную оценку многочисленных клинических состояний.Однако иногда результаты этого обследования могут сбивать с толку или быть трудными для интерпретации.

    В этой статье представлен всесторонний обзор электрофореза сывороточных белков, включая обсуждение того, как проводится исследование, что он измеряет и когда это показано. В статье также представлено простое руководство по интерпретации результатов и предложения по дальнейшим действиям при аномальных результатах.

    Определения

    Электрофорез — это метод разделения белков на основе их физических свойств.Сыворотка наносится на определенную среду и наносится заряд. Чистый заряд (положительный или отрицательный), а также размер и форма белка обычно используются для дифференциации различных белков сыворотки.1

    Доступно несколько подмножеств электрофореза белков сыворотки. Названия этих подмножеств основаны на методе, который используется для разделения и дифференциации различных компонентов сыворотки. Например, при зонном электрофорезе различные подтипы белков помещают в отдельные физические места на геле, изготовленном из агара, целлюлозы или другого растительного материала.2,3 Белки окрашиваются, и их плотности рассчитываются электронным способом для получения графических данных об абсолютных и относительных количествах различных белков. Дальнейшее разделение подтипов белков достигается путем окрашивания иммунологически активным агентом, что приводит к иммунофлуоресценции и иммунофиксации.

    Компоненты электрофореза сывороточного белка

    Характер результатов электрофореза сывороточного белка зависит от фракций двух основных типов белка: альбумина и глобулинов.Альбумин, основной белковый компонент сыворотки крови, вырабатывается печенью при нормальных физиологических условиях. Глобулины составляют гораздо меньшую долю от общего содержания белков сыворотки. Подмножества этих белков и их относительное количество являются основным направлением интерпретации электрофореза сывороточных белков.1,3

    Альбумин, самый большой пик, находится ближе всего к положительному электроду. Следующие пять компонентов (глобулины) помечены как альфа 1 , альфа 2 , бета 1 , бета 2 и гамма.Пики этих компонентов лежат в направлении отрицательного электрода, а гамма-пик находится ближе всего к этому электроду. На рисунке 1 показана типичная нормальная картина распределения белков, определенная с помощью электрофореза белков сыворотки.


    Рис. 1

    Типичный нормальный образец для электрофореза сывороточного белка.

    АЛЬБУМИН

    Полоса альбумина представляет собой самый крупный белковый компонент сыворотки крови человека. Уровень альбумина снижается в условиях, когда печень производит меньшее количество белка или имеет место повышенная потеря или разложение этого белка.Недоедание, серьезные заболевания печени, почечная недостаточность (например, при нефротическом синдроме), гормональная терапия и беременность могут быть причиной низкого уровня альбумина. Ожоги также могут привести к низкому уровню альбумина. Уровни альбумина повышаются у пациентов с относительным снижением содержания воды в сыворотке крови (например, при обезвоживании).

    АЛЬФА-ФРАКЦИЯ

    Двигаясь к отрицательной части геля (то есть к отрицательному электроду), следующие пики включают компоненты альфа 1 и альфа 2 .Фракция альфа 1 -белка состоит из альфа 1 -антитрипсина, тироид-связывающего глобулина и транскортина. Злокачественные новообразования и острое воспаление (в результате действия реагентов острой фазы) могут увеличивать полосу альфа 1 -белка. Снижение полосы альфа 1 -белка может происходить из-за дефицита альфа 1 -антитрипсина или снижения выработки глобулина в результате заболевания печени. Церулоплазмин, альфа 2 -макроглобулин и гаптоглобин вносят вклад в полосу альфа 2 -белка.Компонент альфа 2 увеличивается как реагент острой фазы.

    БЕТА-ФРАКЦИЯ

    Бета-фракция имеет два пика, обозначенных как бета 1 и бета 2 . Бета 1 состоит в основном из трансферрина, а бета 2 содержит бета-липопротеин. IgA, IgM, а иногда и IgG, наряду с белками комплемента, также могут быть идентифицированы в бета-фракции.

    ГАММА-ФРАКЦИЯ

    Большая часть клинического интереса сосредоточена на гамма-области спектра белков сыворотки, поскольку иммуноглобулины мигрируют в эту область.Следует отметить, что иммуноглобулины часто можно найти во всем электрофоретическом спектре. С-реактивный белок (CRP) расположен в области между бета- и гамма-компонентами.1

    Показания

    Электрофорез сывороточного белка обычно выполняется при подозрении на множественную миелому. Обследование также следует рассматривать в других ситуациях «красного флага» (Таблица 1) .2–4

    Просмотр / печать таблицы

    ТАБЛИЦА 1
    Показания для электрофореза сывороточного белка

    Подозрение на множественную миелому, макроглобулинемию Вальденстрема, первичный амилоидоз или родственное заболевание

    Необъяснимая периферическая невропатия (не связанная с длительным сахарным диабетом, воздействием токсинов, химиотерапией и т. д.)

    Впервые возникшая анемия, связанная с почечной недостаточностью или недостаточностью и болью в костях

    Боль в спине, при которой подозревается множественная миелома

    Гиперкальциемия, связанная с возможным злокачественным новообразованием (например, ассоциированной массой тела) потеря, утомляемость, боль в костях, аномальное кровотечение)

    Образования Rouleaux, отмеченные в мазке периферической крови

    Почечная недостаточность с повышением уровня сывороточного белка

    Необъяснимое патологическое повреждение, выявленное при обнаружении лихорадочного перелома рентгенограмма

    протеинурия Бенс-Джонса

    ТАБЛИЦА 1
    Показания для электрофореза сывороточного белка
    или родственное заболевание

    Необъяснимая периферическая нейропатия (не связанная с длительным сахарным диабетом, воздействием токсинов, химиотерапией и т. Д.))

    Подозрение на множественную миелому, макроглобулинемию Вальденстрема, первичный амилоидоз

    03

    Впервые возникшая анемия, связанная с почечной недостаточностью или недостаточностью и болью в костях

    Боль в спине, при которой подозревается множественная миелома

    Гиперкальциемия, связанная с возможным злокачественным новообразованием (например, ассоциированной массой тела) потеря, утомляемость, боль в костях, аномальное кровотечение)

    Образования Rouleaux, отмеченные в мазке периферической крови

    Почечная недостаточность с повышением уровня сывороточного белка

    Необъяснимое патологическое повреждение, выявленное при обнаружении лихорадочного перелома рентгенограмма

    протеинурия Бенс-Джонса

    Если обследование нормальное, но множественная миелома, макроглобулинемия Вальденстрема, первичный амилоидоз или связанное с ним заболевание все еще подозревается, иммунофиксация также должна быть выполнена, потому что эта методика может быть более сложной. Это способствовало идентификации небольшого моноклонального (М) белка.5

    Интерпретация результатов

    Уровни белков плазмы показывают достаточно предсказуемые изменения в ответ на острое воспаление, злокачественные новообразования, травмы, некроз, инфаркт, ожоги и химические повреждения. Этот так называемый «белковый паттерн острой реакции» включает увеличение фибриногена, альфа 1 -антитрипсина, гаптоглобина, церулоплазмина, СРБ, C3-части комплемента и кислого гликопротеина альфа 1 . Часто наблюдается снижение уровня альбумина и трансферрина.6 В Таблице 26 перечислены характерные образцы белков острой реакции, обнаруженные при электрофорезе белков сыворотки, наряду с соответствующими состояниями или нарушениями.

    Просмотр / печать Таблица

    ТАБЛИЦА 2
    Характерные закономерности белков с острой реакцией, обнаруженные при электрофорезе белков сыворотки, и связанные с ними состояния или расстройства
    Гипогаммаглобулин

    Обнаружено

    Accelerated протеина Электрофорез и сопутствующие состояния или расстройства

    Повышенная дегидратация альбумина Снижение альбумина Хронические кахектические или истощающие заболевания Хронические инфекции Кровоизлияния, ожоги, или энтеропатии с потерей белка Нарушение функции печени в результате снижения синтеза альбумина Недоедание Нефротический синдром Беременность Повышение альфа 1 глобулинов Беременность Пониженное альфа 1 глобулинов Альфа 1 -антитрипсин дефицит Повышенный альфа 2 глобулинов Недостаточность надпочечников Адренокортикостероидная терапия Расширенный диабет mellitus Нефротический синдром Снижение альфа 2 глобулинов Недоедание Мегалобластная анемия Энтеропатии с потерей белка Тяжелая болезнь печени Болезнь Вильсона

    Повышенная бета 1 или бета 2 глобулинов Билиарный цирроз Карцинома (иногда) Болезнь Кушинга Сахарный диабет (в некоторых случаях) Гипотиреоз Железодефицитная анемия Злокачественная гипертензия Нефроз Узловой полиартериит Обструктивная желтуха Беременность в третьем триместре Снижение бета 1 или бета 2 глобулинов Гамлобулины Повышенное содержание гамлобулинов Белок недоедание Хронические инфекции (гранулематозные заболевания) Хронический лимфоцитарный лейкоз Цирроз Болезнь Ходжкина Злокачественная лимфома Множественная миелома Ревматоидные и коллагеновые заболевания (нарушения соединительной ткани) Макроглобулинемия Вальденстрема Снижение гамма-глобулинов Агаммаглобулинемия

    Повышенное обезвоживание альбумина Снижение альбумина Хроническая кахектика или болезни, вызывающие истощение Chroni c Инфекции Кровоизлияния, ожоги или энтеропатии с потерей белка Нарушение функции печени в результате снижения синтеза альбумина Недоедание Нефротический синдром Беременность Повышение альфа 1 глобулинов Беременность Уменьшение альфа 1 глобулинов Alpha 1 дефицит -антитрипсина Повышение альфа 2 глобулинов Надпочечниковая недостаточность Терапия адренокортикостероидами Прогрессирующий сахарный диабет Нефротический синдром Снижение альфа 2 глобулинов Недоедание Мегалобластная анемия Энтеропатии с потерей белка Тяжелая болезнь печени Болезнь Вильсона

    Повышенная бета 1 или иногда бета 2 глобулины Карцинома Цирроз печени (цирроз печени) Сахарный диабет (в некоторых случаях) Гипотиреоз Железодефицитная анемия Злокачественная гипертензия Нефроз Узелковый полиартериит Механическая желтуха Беременность в третьем триместре Снижение бета 1 или бета 2 globu lins Недостаточность питания белков Повышенное содержание гамма-глобулинов Амилоидоз Хронические инфекции (гранулематозные заболевания) Хронический лимфоцитарный лейкоз Цирроз Болезнь Ходжкина Злокачественная лимфома Множественная миелома Ревматоидные и коллагеновые заболевания (нарушения соединительной ткани) Макроглобулин Вальденстрема Макроглобулин 9000 2 Снижение гамма-глобулина 9000 сыворотка крови При электрофорезе наибольшее внимание уделяется гамма-области, которая состоит преимущественно из антител типа IgG.Зона гамма-глобулина уменьшается при гипогаммаглобулинемии и агаммаглобулинемии. Заболевания, вызывающие повышение уровня гамма-глобулина, включают болезнь Ходжкина, злокачественную лимфому, хронический лимфолейкоз, гранулематозные заболевания, заболевания соединительной ткани, заболевания печени, множественную миелому, макроглобулинемию Вальденстрема и амилоидоз. вызывают увеличение гамма-области, некоторые болезненные состояния вызывают однородный пик в виде шипа в фокальной области гамма-глобулиновой зоны (рис. 2).Эти так называемые «моноклональные гаммопатии» представляют собой группу заболеваний, которые характеризуются пролиферацией одного клона плазматических клеток, продуцирующих гомогенный белок М. 6

    Просмотр / печать Рисунок

    Рисунок 2

    Патология электрофореза белков сыворотки крови у пациента с множественной миеломой. Обратите внимание на большой всплеск в гамма-области.


    Рисунок 2

    Паттерн электрофореза сывороточного белка у пациента с множественной миеломой.Обратите внимание на большой всплеск в гамма-области.

    Сравнение моноклональных и поликлональных гаммопатий

    Чрезвычайно важно отличать моноклональные гаммопатии от поликлональных. Моноклональные гаммопатии связаны со злокачественным или потенциально злокачественным клональным процессом. Напротив, поликлональные гаммопатии могут быть вызваны любым реактивным или воспалительным процессом и обычно связаны с доброкачественными заболеваниями. Наиболее частые состояния при дифференциальной диагностике поликлональной гаммопатии перечислены в таблице 3.8,9

    Просмотр / печать таблицы

    ТАБЛИЦА 3
    Дифференциальная диагностика поликлональной гаммопатии
    Диагностика поликлональной гаммопатии
    Инфекции Злокачественные новообразования

    Вирусные инфекции, особенно гепатит, вирус иммунодефицита человека, инфекция, вызванная вирусом иммунодефицита человека, инфекция, вызванная вирусом иммунодефицита человека Очаговые или системные бактериальные инфекции, включая эндокардит, остеомиелит и бактериемию Туберкулез Заболевания соединительной ткани Системная красная волчанка Смешанная соединительная ткань Височный артериит Ревматоидный артрит Саркоид Заболевания печени Цирроз Злоупотребление этанолом Аутоиммунный гепатит Вирусный гепатросингит

    0 Первичный бинарный склероз

    опухоли Опухоли яичников Рак легких Гепатоцеллюлярный рак Опухоли почек Опухоли желудка Гематологические раковые заболевания (см. ниже) Гематологические и лимфопролиферативные нарушения Лимфома Лейкемия Талассемия Серповидноклеточная анемия Другие воспалительные заболевания ditions Заболевания желудочно-кишечного тракта, включая язвенный колит и болезнь Крона Заболевания легких, включая бронхоэктазы, муковисцидоз, хронический бронхит и пневмонит Эндокринные заболевания, включая болезнь Грейвса и тиреоидит Хашимото

    Инфекции Злокачественные новообразования

    Вирусные инфекции, особенно гепатит, вирусная инфекция иммунодефицита человека, мононуклеоз и ветряная оспа Очаговые или системные бактериальные инфекции, включая коннекелосеридит и бактериальный бактериальный эндокардит, остеогенез Заболевания Системная красная волчанка Смешанная соединительная ткань Височный артериит Ревматоидный артрит Саркоид Заболевания печени Цирроз Злоупотребление этанолом Аутоиммунный гепатит Вирусный гепатит Первичный билиарный цирроз Первичный склероз ng холангит

    Солидные опухоли Опухоли яичников Рак легких Гепатоцеллюлярный рак Опухоли почек Опухоли желудка Гематологические раковые заболевания (см. ниже) Гематологические и лимфопролиферативные заболевания Лимфома Лейкемия Талассемия Серповидноклеточная анемия Другие воспалительные заболевания, включая язвенные заболевания желудочно-кишечного тракта, включая заболевания желудочно-кишечного тракта, включая бронхоэктатическая болезнь, муковисцидоз, хронический бронхит и пневмонит Эндокринные заболевания, включая болезнь Грейвса и тиреоидит Хашимото

    Белок М характеризуется наличием четкой, четко выраженной полосы с одиночная тяжелая цепь и аналогичная полоса с легкой цепью каппа или лямбда.Поликлональная гаммопатия характеризуется широкой диффузной полосой с одной или несколькими тяжелыми цепями и легкими цепями каппа и лямбда.7

    После выявления моноклональной гаммопатии с помощью электрофореза сывороточного белка необходимо дифференцировать множественную миелому от других причин этого типа гаммопатии. . Среди этих других причин — макроглобулинемия Вальденстрема, одиночная плазмоцитома, тлеющая множественная миелома, моноклональная гаммопатия неустановленного значения, лейкоз плазматических клеток, болезнь тяжелых цепей и амилоидоз.4,7

    Количество белка М может помочь дифференцировать множественную миелому от моноклональной гаммопатии неопределенного значения. Для окончательного диагноза множественной миеломы требуется от 10 до 15 процентов плазматических клеток, что определяется биопсией костного мозга. Характерные отличительные признаки моноклональных гаммопатий перечислены в таблице 4.7

    View / Print Table

    TABLE 4
    Характерные признаки моноклональных гаммопатий
    Заболевание Отличительные признаки
    9000 Белок

    M проявляется в виде узкого шипа в гамма-, бета- или альфа-областях. 2 .

    Уровень М-белка обычно превышает 3 г на дл.

    Поражения скелета (например, литические поражения, диффузная остеопения, компрессионные переломы позвонков) встречаются у 80 процентов пациентов.

    Для диагностики требуется от 10 до 15 процентов плазматических клеток при биопсии костного мозга.

    Могут присутствовать анемия, панцитопения, гиперкальциемия и почечная недостаточность.

    Моноклональная гаммопатия неопределенного значения

    Уровень М-белка менее 3 г на дл.

    При биопсии костного мозга поражение плазматических клеток составляет менее 10 процентов.

    У больных нет М-белка в моче, литических поражений костей, анемии, гиперкальциемии и почечной недостаточности.

    Тлеющая множественная миелома

    Уровень М-белка превышает 3 г на дл.

    При биопсии костного мозга поражение плазматических клеток превышает 10 процентов.

    У больных нет литических поражений костей, анемии, гиперкальциемии и почечной недостаточности.

    Плазматический лейкоз

    Периферическая кровь содержит более 20 процентов плазматических клеток.

    Уровни М-протеина низкие

    У больных мало костных поражений и мало гематологических нарушений.

    Эта моноклональная гаммопатия встречается у более молодых пациентов.

    Одиночная плазмоцитома

    У пораженных пациентов есть только одна опухоль, без других костных поражений и аномалий мочи или сыворотки.

    Макроглобулинемия Вальденстрема

    Присутствует белок IgM M.

    Пораженные пациенты имеют гипервязкость и гиперклеточный костный мозг с обширной инфильтрацией лимфоплазматических клеток.

    Болезнь тяжелых цепей

    Белок М имеет неполную тяжелую цепь и не имеет легкой цепи.

    ТАБЛИЦА 4
    Характерные черты моноклональных гаммопатий
    Болезнь Отличительные черты

    Множественная миелома

    М-бета , или альфа-спайк в гамма-области 2 регионов.

    Уровень М-белка обычно превышает 3 г на дл.

    Поражения скелета (например, литические поражения, диффузная остеопения, компрессионные переломы позвонков) встречаются у 80 процентов пациентов.

    Для диагностики требуется от 10 до 15 процентов плазматических клеток при биопсии костного мозга.

    Могут присутствовать анемия, панцитопения, гиперкальциемия и почечная недостаточность.

    Моноклональная гаммопатия неопределенного значения

    Уровень М-белка менее 3 г на дл.

    При биопсии костного мозга поражение плазматических клеток составляет менее 10 процентов.

    У больных нет М-белка в моче, литических поражений костей, анемии, гиперкальциемии и почечной недостаточности.

    Тлеющая множественная миелома

    Уровень М-белка превышает 3 г на дл.

    При биопсии костного мозга поражение плазматических клеток превышает 10 процентов.

    У больных нет литических поражений костей, анемии, гиперкальциемии и почечной недостаточности.

    Плазматический лейкоз

    Периферическая кровь содержит более 20 процентов плазматических клеток.

    Уровни М-протеина низкие

    У больных мало костных поражений и мало гематологических нарушений.

    Эта моноклональная гаммопатия встречается у более молодых пациентов.

    Одиночная плазмоцитома

    У пораженных пациентов есть только одна опухоль, без других костных поражений и аномалий мочи или сыворотки.

    Макроглобулинемия Вальденстрема

    Присутствует белок IgM M.

    Пораженные пациенты имеют гипервязкость и гиперклеточный костный мозг с обширной инфильтрацией лимфоплазматических клеток.

    Болезнь тяжелых цепей

    Белок М имеет неполную тяжелую цепь и не имеет легкой цепи.

    У некоторых пациентов с дискразией плазматических клеток электрофорез сывороточного белка может быть нормальным, потому что полный моноклональный иммуноглобулин отсутствует или присутствует на очень низком уровне.7 В одной серии электрофорез сывороточного белка показал всплеск или локализацию только у 82 процентов пациентов с множественной миеломой.У остальных была гипогаммаглобулинемия или нормальная картина. Следовательно, электрофорез белков мочи рекомендуется всем пациентам с подозрением на дискразию плазматических клеток.10

    Еще один момент, который следует учитывать, — это размер пика М-белка. Хотя этот всплеск обычно превышает 3 г на дл у пациентов с множественной миеломой, до одной пятой пациентов с этой опухолью может иметь всплеск М-белка менее 1 г на дл.10 Гипогаммаглобулинемия при электрофорезе белков сыворотки возникает примерно в 10 процентов пациентов с множественной миеломой, у которых нет всплеска сывороточного М-белка.11 У большинства этих пациентов в моче присутствует большое количество белка Бенс-Джонса (моноклональная свободная каппа- или лямбда-цепь) .11 Таким образом, размер пика М-белка не помогает исключить множественную миелому.

    Если множественная миелома все еще рассматривается клинически у пациента, у которого нет всплеска М-белка при электрофорезе белков сыворотки, следует выполнить электрофорез белков мочи.

    Оценка аномального электрофореза сывороточного белка

    Моноклональная гаммапатия присутствует почти у 8 процентов здоровых гериатрических пациентов.12 Всем пациентам с моноклональной гаммопатией требуется дальнейшее обследование для определения причины аномалии. Пациенты с моноклональной гаммопатией неустановленной значимости требуют тщательного наблюдения, поскольку примерно у 1 процента в год развивается множественная миелома или другая злокачественная моноклональная гаммопатия.13 [Уровень доказательности B, проспективное когортное исследование] Алгоритм наблюдения за пациентами с моноклональной гаммопатией представлена ​​на рисунке 3.6

    Просмотр / печать Рисунок

    Рисунок 3

    Предлагаемый алгоритм наблюдения за моноклональной гаммапатией.(SPEP = электрофорез сывороточного белка) Информация из ссылки 6.


    Рисунок 3

    Предлагаемый алгоритм наблюдения за моноклональной гаммапатией. (SPEP = электрофорез сывороточного белка) Информация из ссылки 6.

    Если пик сывороточного М-белка составляет 1,5–2,5 г на дл, важно выполнить нефелометрию, чтобы количественно определить присутствующие иммуноглобулины и получить суточный сбор мочи для электрофореза и иммунофиксации. Если эти исследования в норме, электрофорез сывороточного белка следует повторить через три-шесть месяцев; Если это исследование в порядке, электрофорез сывороточного белка следует повторять ежегодно.Если повторное обследование не соответствует норме или будущие паттерны не соответствуют норме, следующим шагом будет направление пациента к гематологу-онкологу.

    Пик М-белка более 2,5 г на дл должен быть оценен с помощью исследования метастазов в кости, которое включает одно изображение плечевой и бедренной костей. Кроме того, следует провести тест на микроглобулин бета 2 , тест на СРБ и 24-часовой сбор мочи для электрофореза и иммунофиксации. При подозрении на макроглобулинемию Вальденстрема или другой лимфопролиферативный процесс следует выполнить компьютерную томографию брюшной полости, а также аспирацию и биопсию костного мозга.Отклонения от нормы в любом из этих тестов должны привести к направлению к гематологу-онкологу. Если все тесты в норме, можно продолжить наблюдение, показанное на Рисунке 36. Если результаты электрофореза белков сыворотки выявляют отклонения от нормы на каком-либо этапе наблюдения, следует направить к специалисту

    Электрофорез

    Электрофорез — это движение дисперсных частиц относительно жидкости под действием однородного электрического поля. Таким образом, он разделяет компоненты смеси в зависимости от их размера и / или заряда.

    Как запомнить, какой электрод является катодом, а какой анодом?

    Простые … анионы перемещаются к аноду, а катионы — к катоду.

    Визуализация белков на бумаге или в геле — важный этап любого электрофореза. Часто гели с ДНК пропитываются бромидом этидия, который внедряется в ДНК и флуоресцирует в УФ-свете (левое изображение). Белки можно визуализировать с помощью окрашивания серебром или красителя кумасси бриллиантовый синий (изображение справа).В некоторых случаях гели переносят на твердую основу (нитроцеллюлозу), а затем исследуют специфическими антителами (вестерн-блоттинг).


    Бумага для электрофореза

    Обычно используется для разделения АК или пептидов с разным зарядом. Как показано на рисунке, АК и пептиды будут разделяться в зависимости от их заряда, причем наиболее заряженные частицы перемещаются дальше всех.


    PAGE (

    P oly A crylamide G el E лектрофорез) — Native Gel

    Он используется в клинической химии для разделения белков по заряду и / или размеру (агароза IEF, по существу не зависит от размера), а также в биохимии и молекулярной биологии для разделения смешанной популяции фрагментов ДНК и РНК по длине, для оценки размера ДНК и Фрагменты РНК или для разделения белков по заряду.Это процесс, который позволяет сортировать молекулы. С помощью электрического поля молекулы (например, ДНК) можно заставить двигаться через гель, сделанный из агара или полиакриламида. Электрическое поле состоит из отрицательного заряда на одном конце, который проталкивает молекулы через гель, и положительного заряда на другом конце, который протягивает молекулы через гель. Сортируемые молекулы распределяются в лунку гелевого материала. Гель помещается в камеру для электрофореза, которая затем подключается к источнику питания (см. Рисунок слева).При подаче электрического тока более крупные молекулы движутся через гель медленнее, а более мелкие — быстрее. Молекулы разного размера образуют четкие полосы на геле.

    Термин «гель» в данном случае относится к матрице, используемой для содержания, а затем разделения целевых молекул. В большинстве случаев гель представляет собой сшитый полимер, состав и пористость которого выбираются на основе удельного веса и состава анализируемой мишени. При разделении белков или небольших нуклеиновых кислот (ДНК, РНК или олигонуклеотидов) гель обычно состоит из разных концентраций акриламида и сшивающего агента, что дает полиакриламидные ячеистые сети разного размера.При разделении более крупных нуклеиновых кислот (более нескольких сотен оснований) предпочтительной матрицей является очищенная агароза. В обоих случаях гель образует твердую, но пористую матрицу. Агароза состоит из длинных неразветвленных цепей незаряженных углеводов без поперечных связей, в результате чего образуется гель с большими порами, позволяющими разделять макромолекулы и макромолекулярные комплексы.

    «Электрофорез» относится к электродвижущей силе (ЭДС), которая используется для перемещения молекул через матрицу геля.Помещая молекулы в лунки геля и прикладывая электрическое поле, молекулы будут перемещаться через матрицу с разными скоростями, в значительной степени определяемыми их массой, но также их зарядом и формой, которые сильно различаются для белков. Электрофоретическая подвижность малых молекул больше подвижности больших молекул с той же плотностью заряда, что позволяет разделение. Для разделения белков или ДНК обычно pH смеси буфера и белков высокий (~ 9), так что белки несут чистый отрицательный заряд.Однако, поскольку размер, заряд и форма играют роль в том, как молекула будет вести себя в нативном геле, большинство ученых используют гель SDS-PAGE, который предсказуем.


    СТРАНИЦА SDS

    SDS PAGE разделяет молекулы по размеру, поскольку присутствие SDS (додецилсульфата натрия) денатурирует белок, удаляя 2˚, 3˚ и 4˚ структуры (они предполагают линейную цепочку), а SDS покрывает молекулы, придавая им однородный заряд / массу. соотношение. Чаще всего образцы белка также обрабатывают ß-меркаптоэтанолом (ß-ME), чтобы разорвать любые существующие дисульфидные связи и придать им линейную цепь (структура 1˚).

    Наличие стандартов известного размера: всегда необходимо создать калибровочную кривую, которую можно использовать для определения приблизительной молекулярной массы неизвестного белка (полосы).


    IEF (IsoElectric Focusing) электрофорез

    Изоэлектрическая фокусировка (IEF) — это метод разделения различных молекул по разнице в их изоэлектрической точке (pI).Это тип электрофореза, обычно выполняемый на белках в геле, в котором используется тот факт, что общий заряд интересующей молекулы является функцией pH окружающей среды. При заливке геля ИЭФ устанавливается градиент pH

    Белок, который находится в области pH выше своей изоэлектрической точки (pI), будет заряжен отрицательно и будет мигрировать к аноду (положительно). Однако по мере того, как он мигрирует через градиент снижения pH, общий заряд белка будет увеличиваться до тех пор, пока белок не достигнет области pH, соответствующей его pI.В этот момент у него нет чистого заряда, и поэтому миграция прекращается (поскольку нет электрического притяжения ни к одному из электродов). В результате белки фокусируются в четкие неподвижные полосы, причем каждый белок располагается в точке градиента pH, соответствующей его pI. Этот метод обеспечивает чрезвычайно высокое разрешение, когда белки, различающиеся одним зарядом, фракционируются на отдельные полосы.


    2D Гель-электрофорез

    Двумерный гель-электрофорез (2D-электрофорез) — это форма гель-электрофореза, обычно используемая для анализа белков, в которой смеси белков разделены двумя свойствами в двух измерениях на гелях.Как показано на рисунке, 2D-электрофорез начинается с геля IEF (в пробирке), который разделяет белки на основе их pI. Затем его кладут поверх геля SDS-PAGE (90 градусов от первого разделения). Поскольку маловероятно, что две молекулы будут похожи по двум различным свойствам, молекулы более эффективно разделяются в 2D-электрофорезе, чем в 1D-электрофорезе.

    вернуться наверх | предыдущая страница | следующая страница

    Электрофорез в агарозном геле для разделения фрагментов ДНК

    Abstract

    Электрофорез в агарозном геле — наиболее эффективный способ разделения фрагментов ДНК различного размера от 100 пар оснований до 25 kb 1 .Агароза выделена из водорослей родов Gelidium и Gracilaria и состоит из повторяющихся субъединиц агаробиозы (L- и D-галактоза) 2 . Во время гелеобразования полимеры агарозы нековалентно связываются и образуют сеть пучков, размер пор которых определяет свойства молекулярного сита геля. Использование электрофореза в агарозном геле произвело революцию в разделении ДНК. До внедрения агарозных гелей ДНК в первую очередь разделяли с использованием центрифугирования в градиенте плотности сахарозы, которое давало лишь приблизительный размер.Чтобы отделить ДНК с помощью электрофореза в агарозном геле, ДНК загружают в предварительно залитые лунки геля и прикладывают ток. Фосфатный остов молекулы ДНК (и РНК) заряжен отрицательно, поэтому при помещении в электрическое поле фрагменты ДНК будут мигрировать к положительно заряженному аноду. Поскольку ДНК имеет однородное соотношение масса / заряд, молекулы ДНК разделены по размеру внутри агарозного геля в таком порядке, что пройденное расстояние обратно пропорционально логарифму ее молекулярной массы 3 .Ведущей моделью движения ДНК через агарозный гель является «смещенная рептация», когда передний край движется вперед и тянет остальную часть молекулы вдоль 4 . Скорость миграции молекулы ДНК через гель определяется следующим: 1) размером молекулы ДНК; 2) концентрация агарозы; 3) конформация ДНК 5 ; 4) приложенное напряжение, 5) присутствие бромистого этидия, 6) тип агарозы и 7) буфер для электрофореза. После разделения молекулы ДНК можно визуализировать в ультрафиолетовом свете после окрашивания соответствующим красителем.Следуя этому протоколу, учащиеся должны уметь: 1. Понимать механизм, с помощью которого фрагменты ДНК разделяются в гелевой матрице 2. Понимать, как конформация молекулы ДНК будет определять ее подвижность через гелевую матрицу 3. Определить раствор агарозы подходящая концентрация для их нужд 4. Приготовьте агарозный гель для электрофореза образцов ДНК 5. Установите прибор для гель-электрофореза и источник питания 6. Выберите подходящее напряжение для разделения фрагментов ДНК 7.Понять механизм, с помощью которого бромид этидия позволяет визуализировать полосы ДНК 8. Определить размеры разделенных фрагментов ДНК

    Ключевые слова: Генетика, Выпуск 62, гель-электрофорез, агароза, разделение ДНК, бромид этидия

    Протокол

    1 Приготовление геля

    1. Взвешивают соответствующую массу агарозы в колбу Эрленмейера. Гели агарозы готовят с использованием процентного раствора вес / объем. Концентрация агарозы в геле будет зависеть от размеров разделяемых фрагментов ДНК, причем большинство гелей находится в диапазоне от 0.5% -2%. Объем буфера не должен превышать 1/3 вместимости колбы.

    2. Добавьте рабочий буфер в колбу, содержащую агарозу. Вращайте, чтобы перемешать. Наиболее распространенными буферами для прогрева геля являются ТАЕ (40 мМ трис-ацетат, 1 мМ EDTA) и TBE (45 мМ трис-борат, 1 мМ EDTA).

    3. Расплавить смесь агароза / буфер. Чаще всего это делается путем нагревания в микроволновой печи, но можно также сделать это и над пламенем Бунзена. С интервалами в 30 с снимают колбу и перемешивают содержимое, пока оно хорошо перемешивается.Повторяйте до полного растворения агарозы.

    4. Добавьте бромид этидия (EtBr) до концентрации 0,5 мкг / мл. В качестве альтернативы, гель можно также окрашивать после электрофореза в рабочем буфере, содержащем 0,5 мкг / мл EtBr, в течение 15-30 минут с последующим обесцвечиванием в рабочем буфере в течение равного промежутка времени.

    Примечание: EtBr является предполагаемым канцерогеном и должен быть утилизирован в соответствии с правилами учреждения. При работе с гелями, содержащими EtBr, всегда следует носить перчатки.Доступны альтернативные красители для окрашивания ДНК; однако EtBr остается самым популярным из-за его чувствительности и стоимости.

    1. Дайте агарозе остыть либо на столе, либо путем инкубации на водяной бане с температурой 65 ° C. В противном случае лоток с гелем деформируется.

    2. Поместите лоток с гелем в литейный аппарат. В качестве альтернативы можно также заклеить открытые края лотка для геля, чтобы создать форму. Поместите соответствующую гребенку в гелевую форму, чтобы создать лунки.

    3. Залейте расплавленную агарозу в гелевую форму. Дайте агарозе остыть при комнатной температуре. Снимите гребешок и поместите гель в коробку для геля. В качестве альтернативы гель можно завернуть в полиэтиленовую пленку и хранить при 4 ° C до использования (, рис. 1, ).

    2. Установка гелевого аппарата и разделение фрагментов ДНК

    1. Добавьте краситель в образцы ДНК, которые нужно разделить ( рис. 2 ). Краска с гелевой загрузкой обычно изготавливается при 6-кратной концентрации (0.25% бромфенолового синего, 0,25% цианола ксилола, 30% глицерина). Загрузка красителя помогает отследить, как далеко прошел образец ДНК, а также позволяет образцу погрузиться в гель.

    2. Запрограммируйте источник питания на желаемое напряжение (1–5 В / см между электродами).

    3. Добавьте достаточное количество рабочего буфера, чтобы покрыть поверхность геля. Важно использовать тот же рабочий буфер, который использовался для приготовления геля.

    4. Подсоедините провода коробки с гелем к источнику питания.Включите источник питания и убедитесь, что гелевый бокс и источник питания работают.

    5. Снимите крышку. Медленно и осторожно загрузите образец (ы) ДНК в гель ( рис. 3, ). Маркер подходящего размера ДНК всегда следует загружать вместе с экспериментальными образцами.

    6. Установите крышку на контейнер с гелем. Катод (черные выводы) должен быть ближе к лункам, чем анод (красные выводы). Дважды проверьте, что электроды вставлены в правильные гнезда источника питания.

    7. Включите питание. Наносите гель, пока краситель не переместится на необходимое расстояние.

    3. Наблюдение за разделенными фрагментами ДНК

    1. После завершения электрофореза выключите источник питания и снимите крышку контейнера с гелем.

    2. Извлеките гель из контейнера для геля. Слейте лишний буфер с поверхности геля. Поместите лоток для геля на бумажные полотенца, чтобы впитать лишний буферный раствор.

    3. Удалите гель из лотка для геля и подвергните гель воздействию ультрафиолета.Чаще всего это делается с помощью системы гель-документации ( Рис. 4 ). Полосы ДНК должны отображаться как оранжевые флуоресцентные полосы. Сделайте снимок геля ( рис. 5, ).

    4. Утилизируйте гель и рабочий буфер в соответствии с правилами учреждения.

    4. Типичные результаты

    Рисунок 5 представляет собой типичный результат после электрофореза в агарозном геле продуктов ПЦР. После разделения полученные фрагменты ДНК видны в виде четко определенных полос.Стандарт ДНК или лестницу следует разделять до такой степени, чтобы можно было эффективно определять размеры полос образца. В показанном примере фрагменты ДНК размером 765 п.н., 880 п.н. и 1022 п.н. разделяют на 1,5% агарозном геле вместе с 2-логарифмической лестницей ДНК.

    Рисунок 1. Затвердевший гель агарозы после удаления гребня.

    Рис. 2. Студентка добавляет краситель к своим образцам ДНК.

    Рис. 3. Студент загружает образец ДНК в лунку геля.

    Рисунок 4. Пример системы документации геля.

    Рис. 5. Изображение гелевого пост-электрофореза. EtBr добавляли к гелю перед электрофорезом до конечной концентрации 0,5 мкг / мл с последующим разделением при 100 В в течение 1 часа. Гель подвергали воздействию ультрафиолета и фотографировали с помощью системы документирования геля.

    Обсуждение

    Электрофорез в агарозном геле оказался эффективным и действенным способом разделения нуклеиновых кислот.Высокая прочность геля агарозы позволяет работать с гелями с низким процентным содержанием для разделения больших фрагментов ДНК. Молекулярное просеивание определяется размером пор, образованных пучками агарозы 7 в гелевой матрице. Как правило, чем выше концентрация агарозы, тем меньше размер пор. Традиционные агарозные гели наиболее эффективны при разделении фрагментов ДНК размером от 100 до 25 т.п.н. Для разделения фрагментов ДНК размером более 25 т.п.н. потребуется использовать гель-электрофорез в импульсном поле 6 , который включает приложение переменного тока с двух разных направлений.Таким образом, фрагменты ДНК большего размера разделяются скоростью, с которой они переориентируются при изменении направления тока. Фрагменты ДНК размером менее 100 п.н. более эффективно разделяются с помощью электрофореза в полиакриламидном геле. В отличие от агарозных гелей, матрица полиакриламидного геля образуется в результате химической реакции, управляемой свободными радикалами. Эти более тонкие гели имеют более высокую концентрацию, работают вертикально и имеют лучшее разрешение. В современном секвенировании ДНК используется капиллярный электрофорез, при котором капиллярные трубки заполняются гелевой матрицей.Использование капиллярных трубок позволяет применять высокие напряжения, тем самым обеспечивая быстрое разделение фрагментов ДНК (и определение последовательности ДНК).

    Агароза может быть модифицирована для создания агарозы с низкой температурой плавления путем гидроксиэтилирования. Агароза с низкой температурой плавления обычно используется, когда требуется выделение разделенных фрагментов ДНК. Гидроксиэтилирование снижает плотность упаковки агарозных пучков, эффективно уменьшая размер их пор 8 . Это означает, что фрагменту ДНК того же размера потребуется больше времени, чтобы пройти через легкоплавкий агарозный гель, в отличие от стандартного агарозного геля.Поскольку пучки связываются друг с другом посредством нековалентных взаимодействий 9 , можно повторно расплавить гель агарозы после того, как он застынет.

    EtBr — наиболее распространенный реагент, используемый для окрашивания ДНК в агарозных гелях 10 . Под воздействием ультрафиолетового излучения электроны в ароматическом кольце молекулы этидия активируются, что приводит к высвобождению энергии (света), когда электроны возвращаются в основное состояние. EtBr работает, внедряясь в молекулу ДНК в зависимости от концентрации.Это позволяет оценить количество ДНК в любой конкретной полосе ДНК на основе ее интенсивности. Из-за его положительного заряда использование EtBr снижает скорость миграции ДНК на 15%. EtBr является подозреваемым мутагеном и канцерогеном, поэтому следует проявлять осторожность при обращении с агарозными гелями, содержащими его. Кроме того, EtBr считается опасными отходами и должен утилизироваться надлежащим образом. Альтернативные красители для ДНК в агарозных гелях включают SYBR Gold, SYBR green, Crystal Violet и Methyl Blue.Из них метиловый синий и кристально-фиолетовый не требуют воздействия на гель ультрафиолетового света для визуализации полос ДНК, тем самым снижая вероятность мутации, если требуется извлечение фрагмента ДНК из геля. Однако их чувствительность ниже, чем у EtBr. SYBR gold и SYBR green являются высокочувствительными УФ-зависимыми красителями с меньшей токсичностью, чем EtBr, но они значительно дороже. Более того, все альтернативные красители либо не работают, либо не работают при прямом добавлении в гель, поэтому гель необходимо будет подвергнуть последующему окрашиванию после электрофореза.Из-за стоимости, простоты использования и чувствительности EtBr по-прежнему остается предпочтительным красителем для многих исследователей. Однако в определенных ситуациях, например, когда удаление опасных отходов затруднено или когда молодые студенты проводят эксперимент, может быть предпочтительнее менее токсичный краситель.

    Краски, используемые в гель-электрофорезе, служат трем основным целям. Сначала они увеличивают плотность образца, позволяя ему погрузиться в гель. Во-вторых, красители придают цвет и упрощают процесс загрузки. Наконец, красители перемещаются через гель со стандартной скоростью, что позволяет оценить расстояние, на которое мигрировали фрагменты ДНК.

    Точные размеры разделенных фрагментов ДНК можно определить, построив логарифм молекулярной массы для различных полос стандарта ДНК в зависимости от расстояния, пройденного каждой полосой. Стандарт ДНК содержит смесь фрагментов ДНК заранее определенного размера, которые можно сравнить с неизвестными образцами ДНК. Важно отметить, что разные формы ДНК проходят через гель с разной скоростью. Суперспиральная плазмидная ДНК из-за своей компактной конформации движется через гель быстрее всего, за ним следует линейный фрагмент ДНК того же размера, а открытая кольцевая форма движется медленнее всего.

    В заключение, с момента принятия агарозных гелей в 1970-х годах для разделения ДНК, он оказался одним из самых полезных и универсальных методов в исследованиях биологических наук.

    Электрофорез сывороточного белка (SPEP) | Мичиган Медицина

    Обзор теста

    Тест электрофореза белков сыворотки (SPEP) измеряет конкретные белки в крови, чтобы помочь идентифицировать некоторые заболевания. Белки — это вещества, состоящие из более мелких строительных блоков, называемых аминокислотами.Белки несут положительный или отрицательный электрический заряд и перемещаются в жидкости, когда находятся в электрическом поле. Электрофорез белков сыворотки использует электрическое поле для разделения белков в сыворотке крови на группы одинакового размера, формы и заряда.

    Сыворотка крови содержит две основные группы белков: альбумин и глобулин. И альбумин, и глобулин переносят вещества через кровоток. С помощью белкового электрофореза эти две группы можно разделить на пять меньших групп (фракций):

    • Альбумин. Белки альбумина препятствуют вытеканию крови из кровеносных сосудов. Альбумин также помогает переносить некоторые лекарства и другие вещества через кровь и важен для роста и заживления тканей. Более половины белка в сыворотке крови составляет альбумин.
    • Глобулин Альфа-1. Липопротеины высокой плотности (ЛПВП), «хороший» тип холестерина, включены в эту фракцию.
    • Альфа-2 глобулин. Белок, называемый гаптоглобином, который связывается с гемоглобином, включен во фракцию альфа-2 глобулина.
    • Бета-глобулин. Белки бета-глобулина помогают переносить вещества, такие как железо, через кровоток и помогают бороться с инфекцией.
    • Гамма-глобулин. Эти белки также называют антителами. Они помогают предотвратить инфекцию и бороться с ней. Гамма-глобулины связываются с чужеродными веществами, такими как бактерии или вирусы, в результате чего иммунная система разрушает их.

    Каждая из этих пяти групп белков движется в электрическом поле с разной скоростью и вместе формирует определенный паттерн.Этот образец помогает выявить некоторые заболевания.

    Зачем это нужно

    Электрофорез сывороточного белка чаще всего проводится для диагностики и мониторинга широкого спектра заболеваний. К ним относятся:

    • Некоторые формы рака.
    • Проблемы с почками или печенью.
    • Проблемы с иммунной системой.
    • Состояния, приводящие к плохому питанию.

    Как подготовиться

    Вам не нужно ничего делать перед этим тестом.

    Поговорите со своим лечащим врачом о любых проблемах, которые у вас есть относительно необходимости теста, связанных с ним рисков, того, как он будет проводиться или что могут означать результаты. Чтобы помочь вам понять важность этого теста, заполните информационную форму медицинского теста.

    Как это делается

    Медицинский работник возьмет кровь:

    • Оберните эластичную ленту вокруг вашего плеча, чтобы остановить кровоток. Это увеличивает размер вены под лентой, что упрощает введение иглы в вену.
    • Очистите место иглы спиртом.
    • Введите иглу в вену. Может потребоваться более одной иглы.
    • Присоедините к игле трубку, чтобы наполнить ее кровью.
    • Снимите повязку с руки, когда наберется достаточно крови.
    • При извлечении иглы приложите марлевую салфетку или ватный диск к месту укола.
    • Сдавите это место, а затем наложите повязку.

    Каково это

    Образец крови берется из вены на руке.Плечо обернуто резинкой. Может ощущаться стеснение. Вы можете вообще ничего не чувствовать от иглы или можете почувствовать быстрое укусывание или защемление.

    Риски

    Очень мала вероятность возникновения проблемы из-за забора крови из вены.

    • На этом участке может образоваться небольшой синяк. Вы можете снизить вероятность появления синяков, если надавите на участок кожи в течение нескольких минут.
    • В редких случаях после взятия пробы крови вена может опухнуть.Эта проблема называется флебитом. Для лечения этого состояния можно использовать теплый компресс несколько раз в день.

    Результаты

    Тест электрофореза белков сыворотки (SPEP) измеряет конкретные белки в крови, чтобы помочь идентифицировать некоторые заболевания. Результаты тестов для каждой белковой группы приведены в процентах от общего количества сывороточного белка. Чтобы получить фактическое количество каждой фракции, необходимо также провести тест, измеряющий общий белок сыворотки.

    Нормальный

    Нормальные значения, перечисленные здесь, называемые эталонным диапазоном, являются лишь ориентировочными.Эти диапазоны варьируются от лаборатории к лаборатории, и ваша лаборатория может иметь другой диапазон от нормального. Отчет вашей лаборатории должен содержать диапазон, который использует ваша лаборатория. Кроме того, ваш врач оценит ваши результаты на основе вашего здоровья и других факторов. Это означает, что значение, выходящее за рамки нормальных значений, перечисленных здесь, может быть нормальным для вас или вашей лаборатории.

    Результаты обычно готовы через 2–3 дня.

    2

    1

    01252

    Электрофорез сывороточного протеина сноска 1

    Общее количество сывороточного протеина в граммах на децилитр (г / дл)

    Общее количество сывороточного протеина граммы на литр (г / л) (единицы СИ)

    Альбумин (взрослый)

    3.8–5,0

    38–50

    Глобулин Альфа-1

    0,1–0,3

    1–3

    Глобулин Альфа-2

    6–10

    Бета-глобулин

    0,7–1,4

    7–14

    Гамма-глобулин

    9.7–1,6

    7–16

    Высокие значения

    Высокие значения могут быть вызваны многими причинами. Здесь показаны некоторые из наиболее распространенных.

    • Высокий альбумин: обезвоживание
    • Высокий альфа-1-глобулин: Инфекция; воспаление
    • Высокий альфа-2-глобулин: Воспаление; заболевание почек
    • Высокий уровень бета-глобулина: очень высокий уровень холестерина; низкий уровень железа (железодефицитная анемия)
    • Высокий гамма-глобулин: воспаление; инфекционное заболевание; болезнь печени; некоторые формы рака

    Низкие значения

    Низкие значения могут быть вызваны многими причинами.Здесь показаны некоторые из наиболее распространенных.

    • Низкий уровень альбумина: плохое питание; воспаление; болезнь печени; заболевание почек
    • Низкий уровень глобулина альфа-1: сильное воспаление; заболевание печени
    • Низкий уровень альфа-2-глобулина: проблемы с щитовидной железой; Заболевание печени
    • Низкий уровень бета-глобулина: плохое питание
    • Низкий уровень гамма-глобулина: проблемы с иммунной системой

    Что влияет на тест

    Причины, по которым вы не сможете пройти тест или почему его результаты могут оказаться бесполезными, включают:

    • Высокий уровень липидов (гиперлипидемия).
    • Железодефицитная анемия.
    • Некоторые лекарства, такие как кортикостероиды, инсулин, препараты для снижения уровня холестерина (статины) и противозачаточные таблетки.
    • Беременность.

    Что думать о

    • Электрофорез белка в моче также может быть проведен, особенно если результаты теста электрофореза сывороточного белка не соответствуют норме. Обычно в моче содержится очень мало белка, но при некоторых заболеваниях (например, множественной миеломе) большое количество белка попадает в мочу.
    • Хотя аномальные уровни белка могут быть обнаружены при многих состояниях (таких как заболевание почек, хроническое заболевание печени, системная красная волчанка, ревматоидный артрит или проказа), электрофорез белков сыворотки обычно не проводится для диагностики этих состояний.
    • Можно провести специальный тест на одну из основных частей группы альфа-1 глобулинов (называемую антитрипсином альфа-1). Альфа-1-антитрипсин подавляет ферменты в легких, расщепляющие белок. Эти ферменты могут повреждать нормальную ткань легких и вызывать эмфизему или хроническую обструктивную болезнь легких (ХОБЛ).У людей, рожденных без способности продуцировать альфа-1-антитрипсин, может развиться эмфизема в возрасте 30-40 лет. Это состояние можно обнаружить, проверив их на альфа-1-антитрипсин. Чтобы узнать больше, см. Тему Генетическое тестирование на дефицит антитрипсина альфа-1.
    • Тест на общий сывороточный белок часто проводится одновременно с электрофорезом сывороточного белка. Чтобы узнать больше, смотрите тему Общий белок сыворотки.

    Список литературы

    Цитаты

    1. Fischbach FT, Dunning MB III, ред.(2009). Руководство по лабораторным и диагностическим исследованиям , 8 изд. Филадельфия: Липпинкотт Уильямс и Уилкинс.

    Консультации по другим работам

    • Chernecky CC, Berger BJ (2008). Лабораторные исследования и диагностические процедуры, 5-е изд. Сент-Луис: Сондерс.
    • Fischbach FT, Dunning MB III, ред. (2009). Руководство по лабораторным и диагностическим исследованиям, 8-е изд. Филадельфия: Липпинкотт Уильямс и Уилкинс.
    • Pagana KD, Pagana TJ (2010).Руководство Мосби по диагностическим и лабораторным исследованиям, 4-е изд. Сент-Луис: Мосби Эльзевьер.

    Кредиты

    Текущий по состоянию на: 5 августа 2020 г.

    Автор: Healthwise Staff
    Медицинский обзор:
    Энн К. Пуанье, врач-терапевт
    Мартин Дж. Габика, доктор медицины, семейная медицина
    E.Грегори Томпсон, врач-терапевт
    Кэтлин Ромито, доктор медицины, семейная медицина
    Адам Хусни, доктор медицины, семейная медицина

    По состоянию на: 5 августа 2020 г.

    Автор: Здоровый персонал

    Медицинское обозрение: Энн С. Пуанье, врач внутренних болезней и Мартин Дж. Габика, доктор медицины, семейная медицина и Э. Грегори Томпсон, врач внутренних болезней, Кэтлин Ромито, доктор медицины, семейная медицина и Адам Хусни, доктор медицины, семейная медицина

    Гель-электрофорез в импульсном поле (PFGE) | Методы PulseNet | PulseNet

    Что такое PFGE?

    Гель-электрофорез в импульсном поле (PFGE) — это лабораторный метод, используемый учеными для получения отпечатков ДНК бактериального изолята.Бактериальный изолят — это группа бактерий одного типа. PulseNet изучает изоляты бактерий от больных людей, зараженной пищи и мест ее производства.

    Использует ли PulseNet другие методы снятия отпечатков пальцев?

    PFGE — это текущий «золотой стандарт» метод снятия отпечатков пальцев, используемый в PulseNet. Однако PulseNet переходит к использованию полногеномного секвенирования (WGS). Для некоторых организмов PulseNet также использует анализ тандемных повторов с несколькими локусами переменных (MLVA), чтобы помочь в расследовании вспышек.

    Как работает PFGE?

    1. Ученый берет бактериальные клетки с чашки с агаром.
    2. Ученый смешивает бактериальные клетки с расплавленной агарозой и выливает их в форму для пробок.
    3. Бактериальные клетки вскрываются с помощью биохимических веществ или лизируются, так что ДНК остается свободной в агарозных пробках.
    4. Ученый загружает желатиновую пробку ДНК в гель и помещает ее в электрическое поле, которое разделяет фрагменты ДНК в зависимости от их размера.
    5. Гель окрашен, так что ДНК можно увидеть в ультрафиолетовом (УФ) свете.Цифровая камера делает снимок геля и сохраняет изображение в компьютере.

    Фрагменты ДНК создают отпечаток ДНК с определенным рисунком. На рисунке показан пример геля агарозы, где каждая полоса представляет собой отпечаток ДНК или узор. PFGE отличается от обычного электрофореза ДНК, потому что PFGE может разделять очень большие фрагменты для создания отпечатка пальца путем постоянного изменения направления электрического поля.

    После создания отпечатка ДНК лаборатория общественного здравоохранения анализирует образец отпечатка пальца с помощью программы, известной как BioNumerics *.После анализа лаборатория загружает свой образец в национальную базу данных, где менеджеры баз данных PulseNet Central исследуют образец, чтобы определить, является ли он причиной вспышки или является частью продолжающейся вспышки. Если это так, эти менеджеры баз данных будут работать с микробиологами и эпидемиологами общественного здравоохранения для дальнейшего расследования вспышки.

    Преимущества PFGE

    • Высокое соответствие с эпидемиологическим соответствием
    • Может применяться в качестве универсального универсального метода подтипа для многих различных бактерий с выбором только рестрикционного фермента и условий электрофореза, оптимизированных для каждого вида
    • Стабильные и воспроизводимые образцы рестрикции ДНК
    • Более разборчивый, чем такие методы, как риботипирование или множественное типирование последовательностей, внешний значок для многих бактерий

    Начало страницы

    Ограничения PFGE

    • Отнимает много времени
    • Не делает различий между ВСЕМИ неродственными изолятами
    • Модели рестрикции ДНК могут незначительно отличаться в зависимости от технического специалиста
    • Невозможно оптимизировать разделение всех частей геля одновременно
    • Полосы одного размера не могут происходить из одной и той же части хромосомы
    • Изменение одного сайта ограничения может привести к более чем одному изменению диапазона
    • «Родство» следует использовать как ориентир, а не как истинную филогенетическую меру
    • Некоторые штаммы не могут быть типированы PFGE
    • Не дифференцирует изоляты в той степени, которая может быть достигнута с помощью полногеномного секвенирования (WGS)

    * Упоминание или изображение любой компании или продукта не означает их одобрение со стороны CDC или HHS.

    Начало страницы

    Основные типы электрофореза белков и нуклеиновых кислот

    Электрофорез — один из простейших, но наиболее чувствительных аналитических инструментов, используемых для разделения белков, нуклеиновых кислот и других биологических молекул в растворах образцов. Однако знаете ли вы, что существует около восьми типов электрофореза и что каждый из этих методов может дать вам уникальную и ценную информацию о вашем целевом белке? Если вы хотите узнать больше об этих различных типах электрофоретических протоколов, тогда приступим!

    Основные виды электрофореза

    Стандартный электрофорез

    Рутинный электрофорез — это традиционный и наиболее широко используемый клинический лабораторный метод разделения белков и нуклеиновых кислот.Этот метод обычно выполняется на гелеобразной пластине прямоугольной формы и также называется «зонным электрофорезом», поскольку он позволяет разместить несколько образцов и контролей на одном геле и может использоваться для разделения растворенных веществ за один проход. Его также можно использовать для разделения белков, изоферментов, липопротеинов и гемоглобина в спинномозговой жидкости и моче.

    Электрофорез высокого разрешения

    Электрофорез высокого разрешения (HRE) — это не что иное, как рутинный электрофорез с использованием высокого напряжения. Этот метод обычно настоятельно рекомендуется, если вам требуется более высокое разрешение белка (например,грамм. разделение белков ЦСЖ для выявления рассеянного склероза, разделение легких цепей в моче для раннего выявления множественной миеломы и т. д.). Поскольку увеличение напряжения также увеличивает выделяемое тепло, HRE включает в себя охлаждающее оборудование для предотвращения денатурации белков и высыхания геля и других компонентов.

    Полиакриламид (СТРАНИЦА)

    Акриламидный электрофорез (также известный как PAGE) обычно используется для разделения белков на основе размера молекулы и отношения заряда к массе.С помощью вертикальных пластин или геля, встроенных в вертикальные стержни или цилиндры, исследователи могут разделить ДНК из 100 пар оснований или меньше и проанализировать отдельные белки в сыворотке (например, генетические варианты, изоферменты). Помимо простоты и скорости разделения, исследователи любят PAGE, поскольку гели стабильны в широком диапазоне pH и температуры, и могут образовываться гели с разным размером пор.

    Капиллярный электрофорез (CE)

    Капиллярный электрофорез проводят в капиллярах субмиллиметрового диаметра (т.е.е. чрезвычайно тонкие капиллярные трубки из плавленого кремнезема с внутренним диаметром от 25 до 100 мм), сочетающие электрофорез и высокоэффективную жидкостную хроматографию для облегчения разделения аналитов. Многие исследователи предпочитают использовать КЭ, потому что для этого требуется лишь небольшое количество образца, он чрезвычайно эффективен, дает быстрые результаты и может быть легко автоматизирован.

    Изоэлектрическая фокусировка (IEF)

    Если вы хотите разделить амфотерные соединения (например, белки) с более высоким разрешением, вам необходимо использовать этот протокол.IEF использует химические инфузионные гели для создания градиента pH по поверхности геля и прикладывает чрезвычайно высокое напряжение для облегчения миграции белковых молекул до точки, где их суммарный заряд равен нулю (изоэлектрическая точка). Некоторые из преимуществ использования IEF включают простоту процедуры (т.е. размещение образца не имеет значения, поскольку белок всегда будет в конечном итоге в положении, соответствующем его pl) и его высокое разрешение.

    Иммунофиксационный электрофорез (IFE)

    Обычно IFE используется для выявления моноклональных иммуноглобулиновых гаммопатий или моноклональных экспансий одного нефункционального антитела, такого как IgA, IgG и IgM, присутствие которых может указывать на такие состояния, как множественная миелома или макроглобулинемия Вальденстрема.Его также можно использовать для изучения белковых антигенов и продуктов их расщепления.

    Гель-электрофорез в импульсном поле (PFGE)

    Невозможно разделить большие молекулы ДНК> 50 килобаз (кб) с помощью AGE или PAGE в обычных системах электрофореза, потому что размеры пор геля просто слишком малы для их миграции. Однако вы можете использовать гель-электрофорез в импульсном поле (PFGE), чтобы облегчить успешное фракционирование больших молекул ДНК (до 10 МБ).

    PFGE эффективно разделяет фрагменты ДНК путем подачи электрического тока, который постоянно меняет направление, на матрицу геля.Посредством циклического чередования положительных и отрицательных электродов во время электрофореза молекулы ДНК вынуждены переориентировать себя и в конечном итоге распадаться на более мелкие фрагменты. PFGE обычно используется при генотипировании или генетическом дактилоскопировании и считается золотым стандартом в бактериальном подтипировании из-за его простоты и воспроизводимости.

    Однако этот протокол занимает очень много времени и требует высокого уровня навыков. Кроме того, результаты могут быть трудными для интерпретации, поскольку фрагменты разделены по размеру (т.е.е. разделение не основано на последовательности), а фрагменты одинакового размера могут не принадлежать одной и той же части хромосомы.

    Двумерный электрофорез

    При двумерном электрофорезе образец разделяется с использованием двух различных методов разделения (например, IEF с последующим PAGE или AGE) и идентифицируется в двух измерениях, ориентированных под прямым углом друг к другу. Поскольку полученные полосы дополнительно разрешаются с помощью второго электрофореза, существует большая вероятность того, что вы получите больше информации из своего образца.
    Двумерный электрофорез является узкоспециализированным и обычно используется в исследованиях протеомики и генетики. Хотя он может анализировать тысячи белков за один прогон, этот метод требует значительного количества исходного образца, имеет ограниченную воспроизводимость и низкую пропускную способность. Кроме того, этот метод работает только с биомолекулами среднего и большого размера и не дает точных измерений.

    Основы и последние достижения в области электрофореза в двумерном полиакриламидном геле | Клиническая протеомика

  • 1.

    O’Farrell PH: Двумерный электрофорез белков высокого разрешения. J Biol Chem. 1975, 250: 4007-4021.

    PubMed Central PubMed Google ученый

  • 2.

    Магдельдин С., Чжан Ю., Бо Х, Йошида Ю., Ямамото Т.: Биохимия, генетика и молекулярная биология «Гель-электрофорез — принципы и основы». 2012, Риека, Хорватия: INTECH,

    Google ученый

  • 3.

    Андерсон Н.Г., Матесон А., Андерсон Н.Л .: Назад в будущее: индекс человеческого белка (ИЧП) и повестка дня постпротеомной биологии. Протеомика. 2001, 1: 3-12.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 4.

    Magdeldin S, Li H, Yoshida Y, Enany S, Zhang Y, Xu B, Fujinaka H, ​​Yaoita E, Yamamoto T: Сравнение протеомов толстой кишки с двумерным электрофорезом мышей до и после нокаута аквапорина 8. J Протеомика.2010, 73: 2031-2040.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 5.

    Jungblut PR, Seifert R: Анализ с помощью двумерного электрофореза высокого разрешения дифференцировочно-зависимых изменений в структуре цитозольного белка лейкозных клеток HL-60. J Biochem Biophys Methods. 1990, 21: 47-58.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 6.

    Wu W, Tang X, Hu W., Lotan R, Hong WK, Mao L: Идентификация и проверка белков, ассоциированных с метастазами, в клеточных линиях рака головы и шеи с помощью двумерного электрофореза и масс-спектрометрии.Clin Exp Metastasis. 2002, 19: 319-326.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 7.

    Enany S, Yoshida Y, Magdeldin S, Bo X, Zhang Y, Enany M, Yamamoto T: Двумерный электрофорез экзопротеома, полученного из приобретенного сообществом метициллин-устойчивого Staphylococcus aureus, принадлежащего клональному комплексу 80. Microbiol Res. 2013, 168: 504-511.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 8.

    Rabilloud T, Chevallet M, Luche S, Lelong C: Двумерный гель-электрофорез в протеомике: прошлое, настоящее и будущее. J Proteomics. 2010, 73: 2064-2077.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 9.

    Bech-Serra JJ, Borthwick A, Colome N, ProteoRed C, Albar JP, Wells M, Sanchez del Pino M, Canals F: многолабораторное исследование, оценивающее воспроизводимость дифференциального протеомного эксперимента 2D-DIGE. J Biomol Tech.2009, 20: 293-296.

    PubMed Central PubMed Google ученый

  • 10.

    Bland AM, Janech MG, Almeida JS, Arthur JM: Источники изменчивости среди повторяющихся образцов, разделенных с помощью двумерного гель-электрофореза. J Biomol Tech. 2010, 21: 3-8.

    PubMed Central PubMed Google ученый

  • 11.

    Chevalier F: Основные возможности протеомики на основе геля.Proteome Sci. 2010, 8: 23-

    PubMed Central Статья PubMed Google ученый

  • 12.

    Chevallet M, Luche S, Diemer H, Strub JM, Van Dorsselaer A, Rabilloud T: Sweet silver: окрашивание серебром без формальдегида с использованием альдоз в качестве проявителей, с улучшенной совместимостью с масс-спектрометрией. Протеомика. 2008, 8: 4853-4861.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 13.

    Шевченко А., Вильм М., Ворм О., Манн М.: Масс-спектрометрическое секвенирование белков полиакриламидных гелей, окрашенных серебром. Anal Chem. 1996, 68: 850-858.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 14.

    Pinol-Roma S, Choi YD, Matunis MJ, Dreyfuss G: Иммуноочистка гетерогенных ядерных рибонуклеопротеиновых частиц выявляет ассортимент РНК-связывающих белков. Genes Dev. 1988, 2: 215-227.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 15.

    Kjaersgard IV, Jessen F: Двумерный гель-электрофорез для обнаружения окисления белка в свежих и испорченных мышцах радужной форели. J. Agric Food Chem. 2004, 52: 7101-7107.

    Артикул PubMed Google ученый

  • 16.

    Gorg A, Postel W, Domscheit A, Gunther S: Двумерный электрофорез с иммобилизованными градиентами pH белков листьев ячменя (Hordeum vulgare): метод, воспроизводимость и генетические аспекты. Электрофорез.1988, 9: 681-692.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 17.

    Gorg A, Postel W, Gunther S: Текущее состояние двумерного электрофореза с иммобилизованными градиентами pH. Электрофорез. 1988, 9: 531-546.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 18.

    Wilkins MR, Gasteiger E, Sanchez JC, Bairoch A, Hochstrasser DF: Двумерный гель-электрофорез для протеомных проектов: эффекты гидрофобности белка и количество копий.Электрофорез. 1998, 19: 1501-1505.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 19.

    Corthals GL, Wasinger VC, Hochstrasser DF, Sanchez JC: Динамический диапазон экспрессии белка: проблема для протеомных исследований. Электрофорез. 2000, 21: 1104-1115.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 20.

    Сантони В., Рабильо Т., Думас П., Роуки Д., Мэншн М., Киффер С., Гарин Дж., Россиньол М.: На пути к извлечению гидрофобных белков на гелях для двумерного электрофореза.Электрофорез. 1999, 20: 705-711.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 21.

    Захеди Р.П., Мейзингер С., Зикманн А: Двумерный бензилдиметил-н-гексадециламмоний хлорид / SDS-PAGE для мембранной протеомики. Протеомика. 2005, 5: 3581-3588.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 22.

    Бабу Дж., Уиллер Д., Альзат О., Периасами М.: Солюбилизация мембранных белков для двумерного гель-электрофореза: идентификация мембранных белков саркоплазматического ретикулума.Анальная биохимия. 2004, 325: 121-125.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 23.

    Паскуали С., Фиалка И., Хубер Л.А.: Препаративный двумерный гель-электрофорез мембранных белков. Электрофорез. 1997, 18: 2573-2581.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 24.

    Rabilloud T, Adessi C, Giraudel A, Lunardi J: Улучшение солюбилизации белков в двумерном электрофорезе с иммобилизованными градиентами pH.Электрофорез. 1997, 18: 307-316.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 25.

    Falvo S, Di Carli M, Desiderio A, Benvenuto E, Moglia A, America T, Lanteri S, Acquadro A: 2-D DIGE-анализ белков, чувствительных к УФ-C излучению, в листьях земного артишока. Протеомика. 2011, 12 (3): 448-60.

    Артикул Google ученый

  • 26.

    Семан С.М., Санг Q-XA: Префракционирование увеличивает нагрузочную способность и идентификацию основных белков из тканей рака груди человека.Анальная биохимия. 2011, 411: 8-

    Статья Google ученый

  • 27.

    Стасик Т., Хубер Л.А.: Увеличение масштаба: стратегии фракционирования в протеомике. Протеомика. 2004, 4: 3704-3716.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 28.

    Boisvert FM, Lam YW, Lamont D, Lamond AI: количественный протеомный анализ субклеточной локализации протеома и изменений, вызванных повреждением ДНК.Протеомика клеток Mol. 2010, 9: 457-470.

    PubMed Central CAS Статья PubMed Google ученый

  • 29.

    Cascio S, Zhang L, Finn OJ: Экспрессия белка MUC1 в опухолевых клетках регулирует транскрипцию провоспалительных цитокинов путем образования комплекса с ядерным фактором-kappaB p65 и связывания с промоторами цитокинов: важность внеклеточного домена. J Biol Chem. 2011, 286: 42248-42256.

    PubMed Central CAS Статья PubMed Google ученый

  • 30.

    Моллой М.П., ​​Герберт Б.Р., Уолш Б.Дж., Тайлер М.И., Трэйни М., Санчес Дж.С., Хохштрассер Д.Ф., Уильямс К.Л., Гули А.А.: Экстракция мембранных белков путем дифференциальной солюбилизации для разделения с использованием двумерного гель-электрофореза. Электрофорез. 1998, 19: 837-844.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 31.

    Чжу К., Ян Ф., О’Нил К.А., Хамлер Р., Любман Д.М., Лин Л., Бардер Т.Дж.: Протеомный анализ с использованием двухмерного жидкостного разделения интактных белков от лизатов цельных клеток.Curr Protoc Protein Sci. 2004, Глава 23: Раздел 23 23-

    Google ученый

  • 32.

    Zhang Y, Yoshida Y, Nameta M, Xu B, Taguchi I, Ikeda T, Fujinaka H, ​​Mohamed SM, Tsukaguchi H, Harita Y, Yaoita E, Yamamoto T: белки клубочков, связанные с щелевой диафрагмой и матриксом адгезия в отростках стопы в нормальной почке крысы сильно фосфорилируется тирозином. Пересадка нефрола Dial. 2010, 25: 1785-1795.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 33.

    Карлссон К., Кернс Н., Любек Г., Фунтулакис М.: Обогащение белков человеческого мозга с помощью хроматографии на гепарине. Электрофорез. 1999, 20: 2970-2976.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 34.

    Fountoulakis M, Takacs MF, Berndt P, Langen H, Takacs B: Обогащение белков с низким содержанием Escherichia coli с помощью гидроксиапатитной хроматографии. Электрофорез. 1999, 20: 2181-2195.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 35.

    Schagger H, von Jagow G: Нативный электрофорез синего цвета для выделения комплексов мембранных белков в ферментативно активной форме. Анальная биохимия. 1991, 199: 223-231.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 36.

    Kofoed EM, Vance RE: Электрофорез в синем полиакриламидном геле для контроля сборки и состава инфламмасом. Методы Мол биол. 2013, 1040: 169-183.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 37.

    Wang F, Wang L, Xu Z, Liang G: Идентификация и анализ мультибелковых комплексов в плаценте. ПлоС один. 2013, 8: e62988-

    PubMed Central CAS Статья PubMed Google ученый

  • 38.

    Salzano AM, Novi G, Arioli S, Corona S, Mora D, Scaloni A: одномерный синий нативный PAGE и двумерный синий нативный / мочевина-PAGE или / SDS-PAGE в сочетании с nLC- ESI-LIT-MS / MS раскрывает гетеромерные и гомомерные комплексы мембранных белков у Streptococcus thermophilus.J Proteomics. 2013, 94: 240-261.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 39.

    Халлиган Б.Д., Руотти В., Джин В., Лаффун С., Твиггер С.Н., Дратц Е.А.: ProMoST (инструмент для скрининга модификаций белков): веб-инструмент для картирования модификаций белков на двумерных гелях. Nucleic Acids Res. 2004, 32: W638-644.

    PubMed Central CAS Статья PubMed Google ученый

  • 40.

    Hiller K, Schobert M, Hundertmark C, Jahn D, Munch R: JVirGel: расчет виртуальных двумерных белковых гелей. Nucleic Acids Res. 2003, 31: 3862-3865.

    PubMed Central CAS Статья PubMed Google ученый

  • 41.

    Фарли AR, Link AJ: Идентификация и количественная оценка посттрансляционных модификаций белков. Методы Энзимол. 2009, 463: 725-763.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 42.

    Bjellqvist B, Ek K, Righetti PG, Gianazza E, Gorg A, Westermeier R, Postel W: Изоэлектрическая фокусировка в иммобилизованных градиентах pH: принцип, методология и некоторые применения. J Biochem Biophys Methods. 1982, 6: 317-339.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 43.

    Gorg A, Weser J, Westermeier R, Postel W, Weidinger S, Patutschnick W, Cleve H: изоэлектрическая фокусировка с иммобилизованными градиентами pH для анализа подтипов и вариантов трансферрина (Tf).Hum Genet. 1983, 64: 222-226.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 44.

    Lopez MF: Неравновесный pH-гель-электрофорез (NEPHGE). Методы Мол биол. 1999, 112: 129-131.

    CAS PubMed Google ученый

  • 45.

    Slibinskas R, Razanskas R, Zinkeviciute R, Ciplys E: Сравнение методов IPG и NEPHGE первого измерения в эксперименте с двумерным гель-электрофорезом с цитозольным ответом развернутого белка у Saccharomyces cerevisiae.Proteome Sci. 2013, 11: 36-

    PubMed Central CAS Статья PubMed Google ученый

  • 46.

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

    2008 - 2021 | Охотники за сердцами